EGCG联合维生素E对铅暴露仔鼠海马氧化应激及相关蛋白的影响
目的： 研究表没食子儿茶素没食子酸酯（epigallocatechin gallate，EGCG）与维生素E（vitamin E，VitE）联用对不同时期母鼠铅暴露所致仔鼠阿尔茨海默病（Alzheimer’s disease，AD）淀粉样变的干预作用，探讨EGCG与VitE的联用对铅致AD样病变是否存在协同作用及其可能机制。 方法： 将SPF级昆明小鼠33只（雌22只、雄11只），按照体重顺序随机分为3组：对照组（雌2只、雄1只）、孕前期染铅组（雌10只、雄5只）和哺乳期染铅组（雌10只、雄5只）。孕前期染铅组雌鼠饮0.2％醋酸铅溶液染铅21d，染铅结束后与该组雄鼠合笼以获得孕鼠，自由饮去离子水直至仔鼠断乳。哺乳期染铅组正常饮去离子水、合笼，待孕鼠分娩后饮0.2%醋酸铅溶液染铅21d直至小鼠断乳。对照组在实验过程中自由饮去离子水，合笼后获得孕鼠直至分娩后仔鼠断乳。 断乳后，孕前期染铅组和哺乳期染铅组所产仔鼠再按体重顺序编号，分别随机分为7组，即生理盐水组、玉米油组、EGCG干预组（3.0 mg/kg）、VitE干预组（30IU/kg）、联合干预组（1）（EGCG3.0 mg/kg+VitE30 IU/kg）、联合干预组（2）（EGCG1.5 mg/kg+VitE60 IU/kg）、联合干预组（3）（EGCG6.0 mg/kg+VitE15 IU/kg），每组14只，从21 d断乳后开始连续灌胃28 d。对照组所产仔鼠按体重顺序随机选取14只自由饮去离子水。 干预结束后，对所有小鼠进行Morris水迷宫实验；用极谱仪测定小鼠血铅含量；用相应试剂盒测定小鼠海马组织中总超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）活性和丙二醛（malondialdehvde，MDA）含量；用ELISA试剂盒检测小鼠海马组织中Aβ1-40、Aβ1-42含量；用Western blot检测小鼠海马组织中β淀粉样前体蛋白（β-amyloid precursor protein，APP）及β-内分泌酶1（β-secreatase-1，BACE1）蛋白的表达水平。 使用SPSS21.0版本进行统计分析，检验水准α=0.05。 结果： 1.体重结果显示：孕前期染铅组和哺乳期染铅组的小鼠，与对照组相比，第5周龄开始生理盐水组、玉米油组及不同干预组小鼠体重均明显降低（P<0.05）；第9周龄时孕前期染铅组中联合干预组（1）和联合干预组（3）的小鼠体重分别高于生理盐水组和玉米油组（P<0.05），哺乳期染铅组中联合干预组（1）的小鼠体重高于玉米油组（P<0.05）。 2.水迷宫结果显示：孕前期染铅组和哺乳期染铅组中，生理盐水组和玉米油组的平均逃避潜伏期均高于对照组（P<0.05）；EGCG干预组和 VitE干预组的平均逃避潜伏期分别低于生理盐水组和玉米油组（P<0.05）；与单独干预组相比，孕前期染铅组中联合干预组（1）的平均逃避潜伏期降低（P<0.05）；哺乳期染铅组中联合干预组（1）和（3）的平均逃避潜伏期降低（P<0.05）。孕前期和哺乳期染铅组中，生理盐水组和玉米油组的穿越平台次数均明显低于对照组（P<0.05）；三个联合干预组分别与生理盐水组和玉米油组相比，穿越平台次数明显增加（P<0.05）；与单独干预组相比，联合干预组（1）和（3）的穿越平台次数明显增加（P<0.05）。 3.血铅含量结果显示：孕前期染铅组和哺乳期染铅组中，生理盐水组和玉米油组的血铅含量均明显高于对照组（P<0.05）；EGCG干预组和三个联合干预组血铅含量均低于生理盐水组（P<0.05）；三个联合干预组血铅含量均低于玉米油组（P<0.05），而单独干预组与联合干预组的血铅含量差异无统计学意义（P>0.05）。 4.氧化应激指标结果显示：孕前期染铅组和哺乳期染铅组中，生理盐水组和玉米油组与对照组相比，SOD活性显著降低（P<0.05），MDA含量明显升高（P<0.05）；分别与生理盐水组和玉米油组相比，单独干预组和三个联合干预组的SOD活性升高（P<0.05），MDA含量降低（P<0.05）；联合干预组与单独干预组相比，联合干预组（1）、（3）的SOD活性升高（P<0.05），MDA含量差异无统计学意义（P>0.05）。 5.Aβ1-40、Aβ1-42含量结果显示：孕前期染铅组和哺乳期染铅组中，生理盐水组和玉米油组Aβ1-40、Aβ1-42含量均明显高于对照组（P<0.05）；与生理盐水组和玉米油组相比，单独干预组和联合干预组的Aβ1-40、Aβ1-42含量降低（P<0.05）；与单独干预组相比，哺乳期染铅组中，联合干预组（3）Aβ1-42含量比VitE干预组低（P<0.05）。 6.APP、BACE1蛋白表达水平结果显示：孕前期染铅组和哺乳期染铅组中，与对照组相比，生理盐水组、玉米油组及不同干预组APP、BACE1蛋白水平明显增多（P<0.05）；且不同干预组与生理盐水组和玉米油组相比，APP、BACE1蛋白水平明显减少（P<0.05）；联合干预组与单独干预组相比，APP、BACE1蛋白水平明显减少（P<0.05）。 结论： 1.母鼠孕前期或哺乳期的铅暴露，可导致小鼠体内血铅含量升高，影响小鼠生长发育，损伤小鼠空间学习记忆能力，并且可以升高海马组织中氧化应激水平，诱导海马中APP和BACE1蛋白的过度表达，从而增加海马中Aβ1-40、Aβ1-42的水平。 2.EGCG、VitE以及EGCG和VitE联用均可以改善铅暴露引起的小鼠学习记忆能力下降情况，降低AD样变小鼠海马中Aβ1-40、Aβ1-42的含量，降低APP及BACE1蛋白的表达水平，并且在适当剂量下的联合干预效果要优于单独使用EGCG或VitE。
阿尔茨海默病;淀粉样变;铅暴露;表没食子儿茶素没食子酸酯;维生素E
郑州大学
硕士
营养与食品卫生学
李文杰
2017
中文
R749.16
92
2017-11-29（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）