自噬在姜黄素诱导的喉癌Hep-2细胞增殖抑制中的作用
姜黄素是姜黄的主要成分，因其抗癌和抗炎的特点而广为人知。研究表明，姜黄素是广谱抗肿瘤药，对多种恶性肿瘤有抑制作用。此外，临床前动物实验和第一阶段临床试验证明姜黄素具有极小的毒性，即使是相对较高的剂量（12 g/天）也没有出现明显不良反应。大多数化疗药物发挥其作用的机制是促进细胞凋亡，而有研究表明自噬在癌症治疗中也发挥作用。姜黄素可以诱导多种肿瘤细胞发生自噬现象，而自噬在姜黄素诱导的喉癌细胞增殖抑制中的作用还未见报道，本研究以人喉癌Hep-2细胞作为研究对象，探究（1）不同浓度的姜黄素对喉癌 Hep-2细胞的增殖抑制作用以及对自噬相关蛋白表达的影响；（2）自噬在姜黄素诱导的喉癌细胞凋亡中的作用。 研究方法 1. MTT法检测不同浓度的姜黄素以及3-MA处理的人喉癌Hep-2细胞的增殖抑制率，体外评价姜黄素以及3-MA对Hep-2的增值抑制作用。 2.用一定浓度的姜黄素处理细胞后，Western blots检测细胞自噬相关的蛋白（Beclin1， LC3）表达的变化，以此分析姜黄素对Hep-2细胞自噬的影响。 3.使用5mM自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤预处理Hep-2细胞2h后，用40μM的姜黄素处理细胞，MTT法检测细胞活力，并与姜黄素单独处理组比较，体外评价姜黄素联合使用自噬抑制剂3-MA后，对Hep-2细胞的增殖抑制作用。 4.通过Annexin VFITC/PI流式细胞术检测使用3-MA预处理组以及姜黄素单独处理组对Hep-2细胞的凋亡率。 5.荧光染料吖啶橙（AO）染色法定性的观察使用3-MA预处理组以及单独使用姜黄素组细胞自噬水平的变化。 6. Western blot检测3-MA预处理组自噬相关蛋白LC3、Beclin1，以及凋亡相关蛋白Bcl-2，Bax的表达水平，并与姜黄素单独处理组以及3-MA单独处理组相比较。 研究结果 1. MTT结果显示：随着姜黄素以及3-MA浓度的升高以及处理时间的增加，对喉癌Hep-2的抑制作用逐渐增加，呈时间-剂量-依赖性的抑制Hep-2细胞的体外增殖。 2. Western blots结果显示，随着姜黄素浓度的升高，自噬相关蛋白Beclin1、LC3Ⅱ的表达量升高，提示细胞自噬水平升高，并具有统计学意义。 3. MTT结果显示：使用自噬抑制剂3-MA预处理Hep-2细胞后，再以一定浓度姜黄素处理细胞，与姜黄素单独处理组以及3-MA单独组处理相比，喉癌细胞活力明显下降。 4.流式细胞术检测结果显示，使用3-MA预处理细胞组与单独使用姜黄素组相比，细胞凋亡率明显增多。 5. AO吖啶橙染色法结果显示，使用3-MA预处理可降低姜黄素引起自噬现象。 6. Western blot结果显示使用3-MA预处理喉癌Hep-2细胞后，Bcl-2以及Bclin-1表达水平降低，Bax蛋白表达水平升高，LC3表达减少。 结论 1.姜黄素能呈时间-剂量-依赖性抑制喉癌Hep-2细胞增殖，同时诱导喉癌Hep-2细胞发生自噬。 2.使用自噬抑制剂3-MA抑制自噬后，可增强姜黄素对喉癌Hep-2细胞系的凋亡诱导效应
喉癌;姜黄素;细胞自噬;Hep-2细胞增殖;抑制作用
郑州大学
硕士
药学
李晓天
2017
中文
R739.65;R285.5
62
2017-11-29（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）