黄芩苷和黄芩素提取分离工艺研究及抗氧化活性评价
黄芩苷和黄芩素是唇形科植物黄芩的主要化学成分，黄芩有清热燥湿、泻火解毒、安胎止血等功效，主要成分有黄芩苷、黄芩素、汉黄芩苷、汉黄芩素等。 目的：本论文主要为了研究利用基于组织破碎法的闪式提取器提取黄芩中黄芩苷和黄芩素的最佳工艺，并对分离纯化得到的黄芩苷和黄芩素进行质量评价，且评价黄芩苷和黄芩素对乳鼠心肌细胞抗氧化能力。 方法：主要以提取出的黄芩苷和黄芩素的含量、得膏率为指标，按照二因素四水平表进行正交试验，考察溶剂和溶剂用量两个因素，得到最佳提取工艺。利用醇提酸沉法分离纯化黄芩苷，溶剂分离法分离纯化黄芩素。参考国内外文献、《中国药典》以及植物提取物国际商务标准，利用熔点对比法、薄层色谱法、紫外-可见分光光度法、核磁共振法、高效液相色谱法、气相色谱法等对提取出的黄芩苷和黄芩素进行质量评价。通过H2O2损伤乳鼠心肌细胞建立氧化应激模型，western blot法检测硫氧还蛋白-过氧化物酶Ⅱ（PRXⅡ)蛋白，评价黄芩苷和黄芩素对乳鼠心肌细胞的抗氧化能力。 结果：1.利用闪式提取器提取黄芩苷的最佳工艺是药材饮片质量与乙醇体积比为1:12的60％乙醇提取3次，提取黄芩素的最佳工艺是用12倍量的55%乙醇提取3次。黄芩苷的提取纯化收率为7.8%，黄芩素的提取纯化收率为5.8%。 2.熔点检测法检测得出黄芩苷和黄芩素的熔点与参考值相同，薄层色谱法检示得出与标准品的Rf值相同，1H-NMR、13C-NMR谱图结果与参考值相同。用高效液相检测黄芩苷的纯度约95%，黄芩素纯度为97%。对黄芩苷干燥失重检查结果为4.52%，黄芩素干燥失重检测结果为3.12%；灰度检查结果得出黄芩苷为0.09%，黄芩素为0.04%；黄芩苷和黄芩素重金属检查均不比标准溶液颜色深；黄芩苷乙醇溶剂残留量检查结果为0.02%，黄芩素未检测到乙醇溶剂残留量，黄芩素中丙酮残留量检查结果为0.25%，乙酸乙酯残留量检测为0.01%；黄芩苷中未检测到农药残留量，黄芩素未检测到p,pˊ-DDT、o,pˊ-DDT，六六六(α-BHC、β-BHC、γ-BHC、δ-BHC)总残留量为0.082 mg/kg，滴滴涕(p,pˊ-DDE、p,pˊ-DDD、p,pˊ-DDT、o,pˊ-DDT)残留量为0.006 mg/kg，检测结果小于药典限度0.2 mg/kg。 3.用200μmol/L H2O2浓度损伤心肌细胞2 h，成功建立氧化应激模型。western blot检测PRXⅡ蛋白显示，氧化应激模型组PRXⅡ蛋白表达量大于正常组蛋白表达量。损伤后的心肌细胞加入黄芩苷和黄芩素，PRXⅡ蛋白与模型组相比呈浓度依赖性减少，且黄芩素组PRXⅡ蛋白减少量大于黄芩苷组的减少量。结论：研究得出黄芩苷和黄芩素最佳提取工艺，以及综合黄芩苷和黄芩素质量评价结果，建立的质量标准评价草案符合国家植物提取物国际商务标准，为黄芩苷和黄芩素的进出口以及产业化生产提供科学依据。黄芩苷和黄芩素对PRXⅡ蛋白表达有影响，对乳鼠心肌细胞有抗氧化作用，且黄芩素的抗氧化作用强于黄芩苷，为黄芩苷和黄芩素的开发利用提供依据。
黄芩苷;黄芩素;组织破碎法提取;抗氧化活性
郑州大学
硕士
药学
毕跃峰;刘英
2017
中文
R284.2
76
2017-11-29（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）