癌相关成纤维细胞通过IL6诱导唾液腺腺样囊性癌细胞发生上皮间质转化而促进侵袭
唾液腺腺样囊性癌（Salivary gland adenoid cystic carcinoma，SACC）是上皮来源的恶性肿瘤，虽生长缓慢，但侵袭性强，易发生远处转移。本课题组已有研究证实SACC中存在癌相关成纤维细胞（Cancer associated fibroblasts，CAFs）。并且，CAFs可以促进 SACC的侵袭。有研究表明，上皮间质转化（Epithelial-to-mesenchymal transition，EMT）是癌细胞增强侵袭性的重要机制。 目的：本研究的主要目的为揭示CAFs是否通过诱导SACC发生EMT而增强其侵袭性，以及SACC发生EMT的分子机制。 材料和方法：本研究所用SACC细胞系包括SACC-83和SACC-LM，CAFs细胞为从 SACC肿瘤组织内提取的两株原代细胞，分别命名为 CAF-A1和CAF-A2。将收集的一天的不含血清的CAFs的条件培养液（Conditional medium，CM）体外诱导SACC细胞，倒置显微镜观察前后SACC细胞形态学的变化。划痕实验考察CAF-A1-CM和CAF-A2-CM诱导SACC前后细胞迁移能力的变化。收集诱导前后的SACC细胞蛋白，用蛋白免疫印记实验（Western blot）检验EMT标记物的表达，具体包括E钙粘蛋白（E-cadherin）、N钙粘蛋白（N-cadherin）和波形蛋白（Vitmentin），，进行统计学分析。采用微流控芯片方法检测细胞的侵袭性，在一侧细胞培养通道内加入 SACC细胞，另一侧刺激诱导通道分别加入CAF-A1-CM和CAF-A2-CM，中间为基质胶（Matrigel），分别观察细胞在24、48、72 h拍照，记录通道内细胞侵袭状况，用Image-Pro Plus测量侵袭距离和面积，进行统计学分析。筛选CAFs中高表达的细胞因子，检测其对SACC侵袭能力的影响。用筛选出的该细胞因子体外诱导 SACC细胞，观察细胞诱导前后形态学变化，蛋白免疫印记实验检测肿瘤细胞诱导前后标志物变化。 结果： CAF-A1和CAF-A2的CM体外诱导SACC-83和SACC-LM细胞三天后，观察细胞形态发生变化，结果发现细胞间粘附降低，细胞排列稍分散，并且有呈纤维状生长的趋势。细胞划痕实验证实，与空白培养液培养的SACC相比CAF-CM诱导后SACC-83和SACC-LM的迁移能力明显增加，提示CAF-CM可增加SACC的迁移能力。微流控芯片侵袭实验中，对照组和诱导组 SACC细胞侵袭的面积和距离有显著差异，CAF-CM诱导组SACC-83和SACC-LM的侵袭面积和距离较对照组有显著增加，数据有统计学意义。蛋白免疫印记实验表明，SACC-83和SACC-LM在经过CAF-CM体外诱导后，上皮标志物E-cadherin下调，间质标志物N-cadherin和Vitmentin上调，差异有统计学意义。因此，从细胞形态学变化、迁移和侵袭能力增加、标志物改变等结果提示 CAF-CM可诱导SACC-83和SACC-LM发生EMT。我们进一步发现CAFs中IL6高表达，并且细胞因子IL6体外诱导SACC-83和SACC-LM后，细胞发生形态学变化，如细胞间粘附降低、且长出细长凸起，有纤维状细胞生长的趋势；蛋白免疫印记实验检测上皮标志物下调，间质标记物上调，结果有统计学意义。上述结果提示IL6可促进SACC发生EMT。 结论：本研究表明CAFs可以诱导SACC细胞发生EMT，进而促进SACC的侵袭。CAFs可能是通过IL-6诱导SACC发生EMT。
唾液腺腺样囊性癌;癌相关成纤维细胞;上皮间质转化;IL6蛋白;肿瘤侵袭
大连医科大学
硕士
口腔基础医学
刘婷姣
2017
中文
R739.87
49
2017-11-29（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）