猪源多杀性巴氏杆菌的病原流行病学及其aroA自杀性质粒的构建
多杀性巴氏杆菌宿主范围广泛，并能够引起多种动物的疾病，可引起引起猪肺疫和猪萎缩性鼻炎，多杀性巴氏杆菌已成为严重危害猪场经济效益的主要病原之一。本试验通过对猪源多杀性巴氏杆菌的流行病学，毒力特性及其自杀性质粒的构建进行研究，得到了以下研究结果： 1.通过对多杀性巴氏杆菌的分离鉴定（2011.11–2013.12），并对前期实验室分离鉴定结果进行统计分析（2009.01–2011.10），结果表明，2009-2013年间，从河南及其周边省份1914份有肺炎等症状猪的肺脏等病料组织中共分离鉴定出142株多杀性巴氏杆菌（总分离率为7.4％），其中A型69株，占48.6%；D型70株，占49.3%；3株不能定型；没有发现B、E和F型。多杀性巴氏杆菌不同年份的分离率介于6.0–10.6%之间，其中2012年显著偏高。另外发现其分离率具有明显的季节性，其中6和12月份最高。 2.在分离出多杀性巴氏杆菌的142份病料中，有47份仅分离出多杀性巴氏杆菌，没有发现其它常见的致病菌，占33.1%；有95份在分离出多杀性巴氏杆菌的同时分离出各种不同的共感染菌，占66.9%（95/142）。最常见的共感染菌是链球菌，占所有共感染病料的50.5%（48/95），其次是副猪嗜血杆菌(41.1%;39/95)、大肠杆菌(29.5%;28/95)、支气管败血波氏杆菌（14.7%;14/95）、沙门氏菌（10.5%;10/95）以及其他病原菌（12.6%;12/95）。在95份共感染病料中，有44份同时分离出三种或三种以上的共感染菌，占共感染病料的46.3%。 3.对2011年所分离的39株多杀性巴氏杆菌进行系统的小鼠毒力试验，其中A型20株，D型19株。试验结果表明多杀性巴氏杆菌血清A型菌株毒力普遍较强，其毒力最强的菌株LD50小于2.6×101CFU，其毒力最弱的菌株LD50为2.1×105CFU。而D型毒力普遍较弱，其毒力最强的菌株LD50为2.0×104CFU。另外，在D型菌株中发现了一株毒力很弱的细菌Pm-18，其LD50在4.8×107CFU以上，该菌株是否能作为天然弱毒疫苗菌株值得进一步研究。 4.本试验通过设计多杀性巴氏杆菌aroA基因上、下臂的引物，扩增其上、下臂基因。使用pMD18-T构建ΔaroA中间转移质粒，通过双酶切pRE112构建自杀性质粒pRE112-ΔaroA。所构建的质粒可以作为敲除多杀性巴氏杆菌aroA基因的工具。本试验所构建的自杀性质粒为构建无抗性标记的多杀性巴氏杆菌aroA基因缺失弱毒株奠定了基础。
猪源多杀性巴氏杆菌;病原流行病学;毒力特性;自杀性质粒
河南科技大学
硕士
生物学
龙塔;赵战勤
2014
中文
S852.612
65
2017-08-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）