ADAM8在DEN诱导的小鼠肝细胞癌发生发展过程中的表达与功能研究
目的：研究去整合素金属蛋白酶8（ ADAM8）在肝细胞癌（HCC）的发生发展中的具体作用。 方法：小鼠被分为5组：每组包含60只小鼠。A组小鼠在24周时间内，仅在每周1、3和5接受腹腔注射300μg/100μl抗ADAM8的单克隆抗体。治疗组B1、B2、B3和 B4小鼠自由饮用含30μg·ml-1 DEN的水24周来诱导肝细胞癌的发生。在每周1、3和5，B1、B2、B3和 B4组小鼠分别腹腔注射 PBS,100μg/100μl,200μg/100μl或300μg/100μl的抗ADAM8单克隆抗体。在实验结束的时候（24周末），小鼠被称重，然后用乙醚进行麻醉，通过心脏穿刺进行采血。我们统计了小鼠的生存率，即24周后存活小鼠的数量/开始实验时小鼠的数量×100。然后小鼠被处死，肝脏被取出。新鲜的肝脏用冰的盐水洗了两次，在干净的纸巾上吸干，称重。相对肝脏重量，即肝脏重量/最终体重×100，每只小鼠肝脏肿瘤部位的肝脏样品被分为两部分，它们分别用来进行组织学检测，蛋白印迹检测。对于组织学检测，肝脏样品在10％的甲醛溶液中固定24小时然后进行脱水和石蜡包埋。每个石蜡包埋的组织块切成6微米的片子，然后用来进行组织学检测。对于蛋白印迹检测，肝脏样品按照体积比（1:10）的比例加入PBS(0.02M,pH7.4)然后进行匀浆，匀浆后的样品被转移到离心管中，在4℃,10000rpm进行离心，中间层的蛋白样品被收集用作蛋白印迹检测。在另外一个实验中，60只小鼠仅自由饮用含30μg·ml-1 DEN的水24周来诱导肝细胞癌。我们利用蛋白印迹的方法检测了诱癌后0、8、16和24周小鼠肝脏ADAM8的表达水平。 结果：抗ADAM8单克隆抗体的干预治疗显著提高了诱癌小鼠的生存率，减少了小鼠体重的损失和相对肝脏重量的增加，它是以一种剂量依赖的方式进行干预治疗的(P＜0.05或P＜0.01)。用抗ADAM8单克隆抗体进行干预治疗后也显著地降低了小鼠血清中 AST和 ALT的酶活性及AFP的表达水平(P＜0.05或 P＜0.01)，延缓了小鼠肝癌的发生与发展。与用PBS干预治疗的实验小鼠相比较，用抗 ADAM8单克隆抗体干预治疗后增强了Caspase3、Bax、P53(P＜0.05或 P＜0.01)在小鼠肝脏组织中的表达，同时也抑制了 VEGF-A、PCNA、Bcl-2在小鼠肝脏组织中的表达(P＜0.05或 P＜0.01)，且其表达情况与抗 ADAM8单克隆抗体呈剂量依赖的关系。 结论：研究提示，ADAM8可能是通过调节这些因子的表达从而促进肝细胞癌的疾病发展，抗 ADAM8单克隆抗体介入治疗可能会成为一种很有潜力的肝癌治疗方法。
肝脏肿瘤;金属蛋白酶;蛋白表达;病理细胞学
河南科技大学
硕士
基础医学
徐正顺;李三强
2015
中文
R735.7;R730.21
72
2017-08-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）