壮药狗蚁草调控PI3K/Akt/P70s6K信号通路抗肝纤维化作用的机制研究
目的:研究壮药狗蚁草抗肝纤维化作用与PI3K/Akt/P70s6K信号通路的关系。 方法:制备狗蚁草乙酸乙酯部位浸膏,灌胃大鼠取含药血清,通过MTT法检测狗蚁草乙酸乙酯部位大鼠含药血清对肝星状细胞(Hepatic Stellate T6 Cells,HSC-T6)细胞增值的作用。 将小鼠随机分为正常对照组、模型组、秋水仙碱组(0.2mg·kg-1)、狗蚁草乙酸乙酯部位高剂量组(相当于生药量40g·kg-1)、中剂量组(相当于生药量20g·kg-1)、低剂量组(相当于生药量10g·kg-1)。除正常组对照除外,其余每组给予25%CCL4花生油溶液背部皮下注射,1次/3d,连续10W。造模同时,各组给与相应药物和蒸馏水灌胃,1次/d,10W后取血及肝组织。分别检测各组小鼠血清中ALT、AST含量,ELISA法测小鼠肝组织中I型胶原蛋白(Collagen Type I,Col I)、III型胶原蛋白(Collagen Type III,Col III)的含量,HE和MASSON染色观察小鼠肝组织肝纤维化程度,并进行评分。采用RT-PCR法检测狗蚁草乙酸乙酯部位对肝纤维化小鼠肝脏组织PI3K/Akt/P70s6K通路相关基因PDGF-B、PTEN、PI3K、Akt、P70s6K、α-SMA转录的影响,采用免疫组化法检测狗蚁草乙酸乙酯部位对肝纤维化小鼠肝脏组织PI3K/Akt/P70s6K通路相关蛋白 PDGF-BB、PTEN、PI3K、Akt、P70s6K、α-SMA表达的影响。 结果:狗蚁草乙酸乙酯部位10%、5%、2.5%的含药血清对HSC-T6细胞的增殖有显著抑制作用。狗蚁草乙酸乙酯部位高、中、低剂量组均能够降低肝纤维化小鼠血清中ALT、AST的含量,降低CCL4所致肝纤维化小鼠的死亡率。狗蚁草乙酸乙酯部位高、中剂量组均能降低肝组织中Col I、Col III的含量,减轻炎症细胞浸润,降低肝脏胶原蛋白的生成,降低Ishak评分,改善病理损伤程度。狗蚁草乙酸乙酯部位低剂量组肝纤维化病变程度与模型组比较接近,但能降低肝组织中Col I的含量。 狗蚁草乙酸乙酯部位高、中剂量组均能下调PI3K/Akt/P70s6K通路相关基因PDGF-B、PI3K、P70s6K、α-SMA转录水平,上调PTEN基因转录水平;下调相关蛋白PDGF-BB、PI3K、P70s6K、α-SMA表达,上调PTEN蛋白表达。狗蚁草乙酸乙酯部位低剂量组能下调PI3K/Akt/P70s6K通路相关基因PI3K转录,下调PDGF-BB蛋白的表达,上调PTEN蛋白表达。 结论:狗蚁草乙酸乙酯部位能够抑制HSC-T6细胞的增殖,降低CCL4所致肝纤维化小鼠血清中ALT、AST含量和肝脏中Col I、Col III的含量,改善肝纤维化小鼠病理损伤程度,其抗肝纤维化的机制可能是通过下调PI3K/Akt/P70s6K通路相关基因PDGF-B、PI3K、P70s6K、α-SMA转录和上调PTEN基因转录,下调相关蛋白PDGF-BB、PI3K、P70s6K、α-SMA表达和上调PTEN蛋白的表达,从而发挥抗纤维化作用。
壮药狗蚁草;抗肝纤维化;信号通路;药理活性;药效机制
广西中医药大学
硕士
药理学
郑作文
2016
中文
R575.2;R285.6
80
2017-03-27(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)