三七总皂苷对阿尔茨海默病氧化应激PI3K/Akt和PLCγ1/PKC信号通路的影响研究
目的:探讨三七总皂苷(PNS)对阿尔茨海默病氧化应激PI3K/Akt和PLCγ1/PKC信号通路影响的研究。 方法:3月龄雄性快速老化痴呆模型小鼠SAMP8随机分为模型组、PNS低剂量组(100mg/kg)、PNS高剂量组(200mg/kg)和石杉碱甲组(Huperzine A,0.3mg/kg),健康正常老化SAMR1小鼠为空白对照组,15只/组。适应性喂养一周后,PNS给药组和石杉碱甲组均以双蒸水调配后按照以上剂量灌胃给药,空白对照组和模型组给予等体积的生理盐水,每天1次,连续给药8周。应用Morris水迷宫检测各组小鼠学习记忆能力的变化;HE染色观察各组小鼠脑组织海马区的病理学变化;PKC试剂盒检测SAMP8脑组织PKC的活力;Real-time qPCR技术测定小鼠脑组织PI3K,Akt,PLCγ1和PKC mRNA的水平;免疫组化和Western blot检测小鼠脑组织PI3K,p-Akt,Akt,p-PLCγ1和PLCγ1蛋白的表达。 结果: 1.Morris水迷宫实验:(1)定位航行实验结果显示:与SAMR1对照组比较,模型组的平均逃避潜伏期明显延长(P<0.01),平台象限停留时间百分比显著降低(P<0.01);与模型组相比,PNS低、高剂量组小鼠的逃避潜伏期显著降低(P<0.01),平台象限停留时间百分比明显增大,差异有统计学意义(P<0.01)。(2)空间探索实验结果显示:与SAMR1对照组比较,模型组的原平台象限停留时间百分比减少(P<0.05);与模型组比较,PNS低、高剂量组小鼠的原平台象限停留时间百分比明显增加(P<0.05),表明PNS对SAMP8的学习记忆能力有改善作用。 2.HE染色结果显示:与对照组比较,模型组小鼠海马区神经元数量明显减少;与模型组比较,PNS低、高剂量组的小鼠海马区神经元结构异常有所改善,细胞分布均匀,排列整齐,神经元数目和锥体细胞数量有所增加,小胶质细胞增生减少。 3.PKC试剂盒结果显示:与模型组比较,PNS低、高剂量组小鼠脑组织的PKC活性均明显升高,差异有统计学意义(P<0.01)。 4.RT-qPCR结果显示:与模型组比较,PNS低剂量组小鼠脑组织的PI3K mRNA表达显著升高(P<0.05),Akt,PLCγ1和PKC的mRNA含量有所升高,但差异无统计学意义(P>0.05),PNS高剂量组小鼠脑组织的PI3K,Akt,PLCγ1和PKC mRNA表达水平均明显升高,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01); 5.免疫组化结果显示:与SAMR1对照组比较,模型组SAMP8大脑海马区PI3K,p-Akt,Akt,p-PLCγ1和PLCγ1的免疫阳性细胞百分比均明显减少(P<0.05或P<0.01);与模型组比较,PNS低、高剂量组的免疫阳性细胞百分比显著增加,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。 6.Western blot结果显示:与对照组比较,模型组SAMP8脑组织的Akt和PLCγ1的蛋白表达水平有所降低,但差异无统计学意义(P>0.05),而PI3K,p-Akt和p-PLCγ1的蛋白表达水平显著降低(P<0.05或P<0.01);与模型组比较,PNS低、高剂量组可不同程度提高SAMP8脑组织PI3K,p-Akt,Akt,p-PLCγ1和PLCγ1的蛋白表达水平,其中PI3K,p-Akt和p-PLCγ1的蛋白表达量差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。 结论: 1. PNS可以改善SAMP8小鼠的学习记忆功能。 2. PNS通过激活PI3K/Akt和PLCγ1/PKC信号通路,从而抑制氧化应激对SAMP8大脑的损伤。
阿尔茨海默病;快速老化痴呆;氧化应激;三七总皂苷干预;PLCγ1蛋白表达;学习记忆功能
广西中医药大学
硕士
药理学
钟振国;黄金兰
2016
中文
R749.16;R285.5
84
2017-03-27(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)