EGCG对ACC-M细胞株PI3K/Akt信号通路中Akt、p-Akt、NF-κB表达的影响
目的：通过将EGCG与PI3K抑制剂LY294002分别、联合应用于ACC-M细胞，检测细胞的生存情况及Akt、p-Akt、NF-κB的表达情况，初步探讨EGCG对涎腺腺样囊性癌的作用机制。 方法： 1、MTT法测定不同浓度EGCG与LY294002分别作用ACC-M细胞24h、48h、72h的抑制率，计算药物半抑制浓度(IC50)；将实验分为阴性对照组、阳性对照组(LY294002 IC50)、EGCG IC50组、EGCG IC20+LY294002 IC10组、EGCG IC40+LY294002 IC10组，测定48h细胞抑制率。 2、普通光学倒置显微镜观察各组药物作用48h细胞形态学变化。 3、流式细胞术检测各组药物作用48h细胞凋亡情况。 4、Western blot检测各组药物作用48h后细胞中Akt、p-Akt、NF-κB的表达。 结果： 1、不同浓度的EGCG(62.5μM、125μM、250μM、500μM)与不同浓度的LY294002(6.25μM、12.5μM、25μM、50μM、100μM)分别作用ACC-M细胞24h、48h、72h，与阴性对照组相比EGCG、LY294002对ACC-M对细胞的抑制作用具有统计学差异(P<0.05)。药物作用48h时 EGCG与 LY294002的IC50分别为156.28μM与30.88μM。阳性对照组、EGCG IC50组、EGCG IC20+LY294002 IC10组、EGCG IC40+LY294002 IC10组的48h细胞抑制率分别为51.65％、51.48%、31.52%和56.65%。 2、细胞观察实验可见药物作用ACC-M细胞48h后，细胞数量减少、间隙增加，由多边形变为梭形，细胞脱壁，部分细胞漂浮在培养基中呈凋亡状态。 3、流式细胞术示所有用药组细胞凋亡率均高于阴性对照组，差异有统计学意义(P<0.05)；EGCG IC50组细胞凋亡率低于阳性对照组，而EGCG IC40+LY294002 IC10组细胞凋亡率高于阳相对照组，差异均具有统计学意义(P<0.05)。 4、Western blot示，与阴性对照组相比，所有用药组的p-Akt表达降低(P<0.05)；EGCG IC50组、EGCG IC20+LY294002 IC10组、EGCG IC40+LY294002 IC10组的Akt、NF-κB表达量均低于阴性对照组(P<0.05)。 结论：EGCG、LY294002均能抑制ACC-M细胞的增殖，EGCG IC40+LY294002 IC10对ACC-M细胞体外生长抑制效果最佳，其作用机制可能与PI3K/Akt信号通路中Akt、p-Akt、NF-κB蛋白的表达情况有关。
涎腺腺样囊性癌;PI3K/Akt信号通路;细胞增殖;细胞凋亡
遵义医学院
硕士
口腔基础医学
李萍
2016
中文
R739.8
54
2017-07-26（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）