羊膜干细胞源性髁突软骨细胞特征性鉴定
目的：采用Transwell共培养系统，诱导人羊膜间充质干细胞（HAMSCs）向髁突软骨样细胞分化，建立软骨细胞种子库，为颞下颌关节骨关节病的治疗探索新的途径。 方法：1.采用机械分离和二步酶消化法分离乳兔髁突软骨细胞(MCCs)，差速贴壁法纯化细胞，镜下观察细胞形态学特征，HE染色、甲苯胺蓝染色、Ⅱ型胶原免疫组化染色鉴定MCCs。2.MCCs和HAMSCs以4：1的比例分别置于Transwell培养皿的上、下室，诱导培养7d、14d、21d，倒置显微镜下观察细胞形态、甲苯胺蓝染色、Ⅱ型胶原免疫组化染色鉴定诱导后细胞，并计算平均阳性染色面积。 结果：1.原代MCCs细胞为短梭、多角形，呈铺路石状生长,并逐渐聚集成簇，细胞生长周期约10d；二代MCCs细胞呈多角形、三角形，细胞质紫红染，细胞核蓝染，呈椭圆形或圆形，可见1-2个核仁；甲苯胺蓝染色见细胞质均匀蓝染，可见蓝紫色异染颗粒，细胞核深蓝染；Ⅱ型胶原免疫组化染色可见细胞质棕褐色异染颗粒，细胞核复染后呈深蓝染；生长周期缩短为5d。2. Transwell共培养系统中，诱导组共培养7d，下层细胞仍呈长梭状，甲苯胺蓝和Ⅱ型胶原免疫组化染色偶见异染颗粒;共培养14d,下层细胞形态多样，甲苯胺蓝染色和Ⅱ型胶原免疫细胞化学染色可见细胞内异染颗粒逐渐增多；共培养21d，下层细胞呈多角形，类 MCCs样形态,甲苯胺蓝染色和Ⅱ型胶原免疫细胞化学染色呈阳性；对照组细胞未见异染颗粒。3.Ⅱ型胶原平均阳性染色面积，MCCs组为35.8％，诱导组下层细胞平均阳性染色面积随共培养时间延长逐渐增加，至21天达到33.6%，与MCCs组比较无明显差异（P＞0.05）；对照组下层细胞平均阳性染色面积仅为1.4%，与 MCCs组和诱导组比较有明显差异（P＜0.05）。 结论：1.通过两次酶消化法可以获得高质量的MCCs。2.应用Transwell共培养体系可以诱导HAMSCs向MCCs分化。3.应用Transwell共培养体系诱导HAMSCs向软骨样细胞的最佳共培养时间为21d。
颞下颌关节骨关节病;髁突软骨细胞;人羊膜间充质干细胞;细胞培养;平均阳性面积百分比
遵义医学院
硕士
口腔基础医学
张跃蓉
2016
中文
R782.6
38
2017-07-26（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）