黄芩素可增强肺腺癌细胞对顺铂的敏感性及其与PI3K/Akt/NF-κB信号通路的关系
目的： 为了研究黄芩素对人肺癌细胞A549耐顺铂株（A549/CDDP）的顺铂细胞毒性的影响并探讨其可能的作用机制。 方法： 1. MTT法测定肿瘤细胞的增殖能力。 2.采用Annexin V/PI双染法检测A549/CDDP的细胞凋亡情况。 3. Transwell法检测A549和A549/CDDP细胞侵袭、迁移能力的变化。 4.采用westen blot法测定各蛋白E-cadherin、Vimentin、p-Akt、Akt、p65、IκBα、c-IAP1, c-IAP2, survivin和Bcl-xL的表达水平。 5. siRNA沉默A549/CDDP细胞中p65的表达，降低NF-κB的活性。 6.采用肿瘤动物模型观察黄芩素对顺铂细胞毒性的影响。 7.统计学：本实验所有数据均使用SPSS16.0软件进行q检验。 结果： 1.黄芩素通过诱导细胞凋亡增强顺铂的细胞毒性作用 黄芩素浓度为200μM时对A549/CDDP细胞有抑制作用，选取100μM黄芩素与顺铂合用后测细胞存活率发现，黄芩素能够明显增强顺铂对A549/CDDP的细胞毒性。Annexin V/PI双染法检测后发现：黄芩素与顺铂合用后能够明显增加细胞的凋亡。 2.动物模型中，黄芩素可增强顺铂细胞毒性 肿瘤动物模型建立后，我们的结果发现，与单用顺铂或者黄芩素组相比较，黄芩素与顺铂联合用药能够显著降低裸鼠体内肿瘤细胞的增长。 3. A549/CDDP细胞发生了EMT 结果显示：与 A549细胞相比，A549/CDDP细胞形态发生了 EMT转变， E-cadherin表达明显降低，Vimentin表达显著上升，A549/CDDP细胞的侵袭、迁移能力明显提高。说明A549耐顺铂株发生了EMT。 4.黄芩素可逆转A549/CDDP细胞的EMT 用黄芩素处理 A549/CDDP细胞后，我们的结果发现：黄芩素可显著降低A549/CDDP细胞的侵袭、迁移能力，并且能上调A549/CDDP细胞中E-cadherin的表达，降低Vimentin的蛋白表达水平，逆转A549/CDDP细胞EMT。 5.黄芩素逆转A549/CDDP细胞EMT与PI3K/Akt信号通路有关 实验结果显示：与A549细胞相比，A549/CDDP细胞中p-Akt的表达明显增强，使用LY294002处理A549/CDDP后可抑制p-Akt的表达，阻断PI3K/Akt信号通路,且能上调E-cadherin的表达，降低Vimentin的表达，降低A549/CDDP细胞的侵袭、迁移能力，并增强顺铂的细胞毒性。而黄芩素随着浓度的增加可逐渐降低p-Akt的表达水平，这些结果说明在A549/CDDP细胞中黄芩素可以抑制PI3K/Akt信号通路的活性，从而逆转EMT，增强顺铂的细胞毒性作用。 6.黄芩素逆转EMT、增强顺铂细胞毒性与抑制PI3K/Akt/NF-κB信号通路有关 实验结果证明：与A549细胞相比，A549/CDDP细胞中p65表达增高，IκBα的表达下降。siRNA沉默p65蛋白表达后发现，E-cadherin的表达增加而Vimentin表达降低，且细胞的侵袭、迁移能力降低，MTT法测得顺铂的细胞毒性增加，说明降低NF-κB活性可逆转EMT。而western blot显示黄芩素可降低p65的表达水平同时上调IκBα的表达水平，而LY294002阻断信号通路后也可降低NF-κB的活性。因此我们得出黄芩素抑制 EMT，增强顺铂的细胞毒性的能力可能是通过调控PI3K/Akt/NF-κB信号通路来实现的。 7.黄芩素能够抑制NF-κB下游靶蛋白的活性 western blot检测结果显示：黄芩素能够明显降低NF-κB所调控的靶蛋白包括抗凋亡蛋白c-IAP1, c-IAP2, survivin和Bcl-xL的表达。 结论：黄芩素能够在体内及体外增加A549/CDDP细胞对顺铂的敏感性，其机制可能是通过阻断细胞内的PI3K/Akt/NF-κB信号通路抑制EMT，抑制抗凋亡基因的表达。
黄芩素;肺腺癌;肿瘤细胞;顺铂;化疗敏感性;信号通路;分子机制
蚌埠医学院
硕士
药理学
陶亮;童旭辉
2016
中文
R963;R734.2
60
2017-04-14（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）