熊果酸经ROCK/PPAR-γ/CXCL16信号通路对ox-LDL诱导的人脐静脉内皮细胞氧化损伤的保护作用
目的：复制高氧化程度的氧化型低密度脂蛋白（High ox-LDL）诱导的人脐静脉内皮细胞（HUVECs）损伤病理模型，证明熊果酸（UA）经ROCK/PPAR-γ/CXCL16信号通路保护血管内皮细胞。 方法：以HUVECs为受试对象，筛选确定High ox-LDL的最佳造模浓度（24h）。实验设计为：正常组、High ox-LDL组、UA+High ox-LDL组、ROCK特异性抑制剂（Y27632）组、Y27632+High ox-LDL组、UA+Y27632+High ox-LDL组、PPAR-γ特异性激活剂（罗格列酮）组、罗格列酮+High ox-LDL组、UA+罗格列酮+High ox-LDL组、PPAR-γ特异性抑制剂（GW9662组）、GW9662+High ox-LDL组、UA+GW9662+High ox-LDL组。采用CCK8法检测各组细胞的存活率；应用分子生物学技术，检测不同处理组中ROCK磷酸化水平（p-ROCK/ROCK非磷酸化）以及PPAR-γ、CXCL16在mRNA和蛋白水平的表达，并运用特异性抑制剂/激活剂证明其级联关系；Amplite ROS Green法测定细胞内ROS含量；并采用SPSS17.0软件统计分析。 结果：35μg/ml High ox-LDL成功复制损伤模型，此时胞内ROS是正常组的2.4倍，p-ROCK/ROCK（非磷酸化）比值升高，CXCL16 mRNA表达上调，PPAR-γmRNA表达显著降低，且PPAR-γ与CXCL16在蛋白水平的表达与mRNA水平相一致，差异有统计学意义（P<0.05)。较之模型组，100μM Y27632(1h)可上调PPAR-γ在蛋白水平的表达，100μM Y27632（1h）及100μM罗格列酮（1h）下调CXCL16蛋白水平以及ROS的含量（P<0.05)，20μM GW9662（30 min)却使CXCL16和ROS表达进一步升高（P<0.05)，即ROCK/PPAR-γ/CXCL16的激活与 High ox-LDL诱导的氧化损伤呈正相关。5、10、20μmol/L UA预孵育16小时，呈剂量依赖性提高受损细胞的存活率（P<0.05），其保护效果小于Y27632及罗格列酮分别和UA共同作用组（P<0.05)，但可被GW9662拮抗（P<0.05)。计算机辅助药物设计软件结果显示，UA的不饱和基团共价氧可以与ROCK的活性位点赖氨酸及酪氨酸残基通过氢键相结合。不同浓度的UA均可降低ROCK的磷酸化水平，提高PPAR-γmRNA和蛋白表达（P<0.05)，降低CXCL16及胞内ROS的生成（P<0.05)。UA+Y27632共孵育能上调PPAR-γ表达，下调CXCL16及ROS的生成，较模型组有明显差异（P<0.05)，相对于分别单用UA及Y27632组却无变化（P>0.05）；GW9662拮抗UA对 CXCL16以及 ROS的下调，使二者生成均升高（P<0.05）；UA可能通过负调控ROCK/PPAR-γ/CXCL16的激活发挥抗损伤的作用。 结论：35μg/ml的High ox-LDL成功复制体外氧化损伤模型，发现外源性的High ox-LDL能诱导HUVECs中CXCL16的高表达；UA可能通过下调ROCK/PPAR-γ/CXCL16信号通路，维稳血管内皮。
熊果酸;氧化型低密度脂蛋白;氧化损伤;信号通路;保护作用;脐静脉内皮细胞
青岛大学
硕士
药理学
王春波;韩彦弢
2016
中文
R543.6
66
2017-04-14（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）