ClC-3氯通道蛋白在肾上腺素能受体激动所致心肌肥厚中的作用研究
目的：获得 ClC-3氯通道蛋白参与体内外肾上腺素能受体激动所致心肌肥厚的实验证据。 方法： (1)肾上腺素能受体激动剂腹腔注射构建心肌肥厚的小鼠模型。 (2)小动物超声心动图检测小鼠室间隔，心室前壁厚度，获得小鼠心脏指数(HW/BW)，结合心脏组织HE染色分析确定小鼠心肌肥厚的程度。 (3)免疫组织化学法检测小鼠心肌ClC-3蛋白的表达变化。 (4)胰蛋白酶消化法原代培养乳鼠心肌细胞，视频监视其搏动情况。 (5)实时荧光定量PCR检测细胞和小鼠心脏心肌肥厚标志基因心房利钠因子（ANF）及ClC-3 mRNA的变化。 (6)蛋白免疫印迹技术（western blot）检测细胞和小鼠心脏ClC-3蛋白表达的变化。 (7) Countstar自动细胞计数分析仪检测分析细胞体积的变化。 结果： (1)成功构建肾上腺素能受体激动剂诱导的心肌肥厚模型。超声心动图显示单独给予β肾上腺素能受体激动剂异丙肾上腺素（ISO）或α肾上腺素能受体激动剂去甲肾上腺素（NE）处理的小鼠室间隔增厚，心室前壁厚度增加；小鼠心脏指数(HW/BW)亦明显升高；HE染色结果显示：ISO、NE处理组较对照组心肌结构松散、胶原纤维含量增多、心肌纤维明显增粗，肌原纤维横截面积明显增大、细胞核聚集且增大。 (2)与对照组相比，ISO和 NE实验组小鼠心肌肥厚标志基因ANF表达量增加，而ClC-3的mRNA表达量减少，免疫组化和蛋白免疫印记结果同样显示ClC-3氯通道蛋白的表达量降低。 (3)β肾上腺素能受体拮抗剂普萘洛尔（Pro）能减轻ISO诱导的心肌肥厚，与对照相比，心脏指数HW/BW显著下降，α肾上腺素能受体拮抗剂酚妥拉明（Phe）处理组与NE处理组相比，心脏指数HW/BW亦有降低的趋势。 (4)普萘洛尔和酚妥拉明分别处理组小鼠心肌肥厚因子与模型组比较，心肌肥厚标志基因心房利钠因子(Atrial natriuretic factor,ANF)的表达明显下调，而ClC-3的表达恢复至接近正常。 (5)肾上腺素能受体激动剂ISO和 NE均能诱导原代代养的乳鼠心肌细胞和 H9c2心肌细胞的细胞体积增大。 (6) ISO和NE能诱导心肌细胞ANF表达量增加，而ClC-3的mRNA表达量减少。ClC-3氯通道蛋白表达量也显著下调。 结论： 肾上腺素能受体激动在诱导心肌肥厚的同时下调心肌细胞ClC-3的表达。
ClC-3氯通道蛋白;肾上腺素能受体激动;心肌肥厚;动物模型
广东药学院
硕士
药理学
毛建文
2016
中文
R542.2
63
2017-06-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）