马铃薯卷叶病毒PLRV RT-LAMP检测方法优化
马铃薯卷叶病毒Potato leaf roll virus (PLRV)是目前严重影响马铃薯产量与品质的主要病毒之一,给马铃薯产业造成巨大损失.本研究采用环介导等温核酸扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)技术建立PLRV的RT-LAMP检测方法.采取单因素变化试验,对RT-LAMP反应体系中多个因素包括引物组合、温度条件及Mg2+、betaine、Bst 3.0 DNA聚合酶、dNTPs、LUNG、SYBR GreenⅠ和引物组合的浓度进行一系列试验和优化.采用RT-PCR检测方法进行平行比对试验,对优化后的RT-LAMP反应体系进行了验证.结果 表明,最佳引物组合为P3,最适反应温度62℃,25 μL反应体系中,Mg2+、betaine、Bst 3.0 DNA聚合酶和LUNG的最佳终浓度分别为4mmol/L、0 mmol/L、0.64 U/μL和0.08 U/μL,dNTPs的最佳用量为1μL(dATP、dGTP、dCTP各0.4 mmol/L,dUTP1.2 mmol/L),SYBR Green Ⅰ(20×)的最佳用量1μL,primer mix的最佳用量2.5 μL(PLRV-FIP/BIP、PLRV-F3/B3和PLRV-LF/LB的浓度分别为0.8、0.2μmol/L和0.6μmol/L),RNA模板1μL(2 ng/μL),加DEPC-H20至25 μL,反应时间50 min.优化后的RT-LAMP检测结果与RT-PCR一致,且可视化判读结果.因此,建立的PLRVRT-LAMP检测方法为进一步开发RT-LAMP检测试剂盒及其实际应用奠定了基础.
马铃薯卷叶病毒(PLRV)、反转录环介导等温扩增(RT-LAMP)、检测方法
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S435.32(病虫害及其防治)
甘肃省农业生物技术研究与应用开发项目GNSW-2016-15;国家重点研发计划2017YFD0201602-4,2018YFD020080501;甘肃省农业科学院院列项目2019GAAS04,2017GAAS29,2017GAAS90
2020-01-07（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
共7页
259-264,306
