10.3760/cma.j.issn.0253?3758.2019.12.009
PDGF?BB通过SIRT3影响糖酵解途径调控肺动脉平滑肌细胞的表型转化
目的 探讨血小板衍生生长因子(PDGF)?BB是否通过去乙酰化酶沉默信息调节因子3 (SIRT3)影响糖酵解途径进而调控肺动脉平滑肌细胞(PASMC)的表型转化.方法 采用组织贴块法培养大鼠原代PASMC.分组实验中以PDGF?BB作为刺激因子,以2?脱氧葡萄糖(2?DG)作为糖酵解途径抑制剂,将PASMC分为空白对照组、PDGF?BB(30 ng/ml)组、PDGF?BB(30 ng/ml)+2?DG(10 mmol/L)组;在慢病毒过表达实验中,将PASMC分为空白对照组、PDGF?BB(30 ng/ml)组,PDGF?BB(30 ng/ml)+SIRT3过表达组,PDGF?BB(30 ng/ml)+空载体组.分别采用实时定量PCR(RT?qPCR)及Western blot法检测PASMC中α?平滑肌肌动蛋白(α?SMA)、平滑肌肌球蛋白重链(SM?MHC)、钙调蛋白(calponin)、波形蛋白(vimentin)等表型指标的表达.同时采用细胞免疫荧光染色检测α?SMA表达水平.采用5?乙炔基?2′?脱氧尿苷(EDU)检测PASMC增殖情况.采用Western blot法检测PDGF?BB刺激后SIRT3的蛋白表达.在慢病毒过表达实验中,分别采用RT?qPCR、Western blot法检测葡萄糖转运蛋白1 (Glut1)及有氧糖酵解酶mRNA和蛋白的表达水平.结果(1)PDGF?BB通过糖酵解途径影响PASMC表型转化:PDGF?BB组细胞收缩表型指标SM?MHC、calponin、α?SMA的mRNA和蛋白表达水平均低于空白对照组(P均<0.05),合成表型指标vimentin的mRNA和蛋白表达水平则均高于空白对照组(P均<0.05).PDGF?BB+2?DG组细胞收缩表型指标SM?MHC、calponin、α?SMA的mRNA和蛋白表达水平均高于PDGF?BB组(P均<0.05),合成表型指标vimentin的mRNA和蛋白表达水平则均低于PDGF?BB组(P均<0.05).免疫荧光结果显示,PDGF?BB组α?SMA阳性细胞数少于空白对照组,而PDGF?BB+2?DG组则多于PDGF?BB组.(2)PDGF?BB通过糖酵解促进细胞增殖:PDGF?BB组细胞增殖数多于空白对照组,而PDGF?BB+2?DG组则少于PDGF?BB组.(3)PDGF?BB抑制PASMC的SIRT3蛋白表达:PDGF?BB组细胞SIRT3蛋白表达水平低于空白对照组(P<0.05).(4)PDGF?BB通过SIRT3影响糖酵解:RT?qPCR结果显示,PDGF?BB组细胞Glut1及糖酵解关键酶HK2、PFKFB3的mRNA表达水平均高于空白对照组(P均<0.05),PDGF?BB+SIRT3过表达组则均低于PDGF?BB组(P均<0.05), PDGF?BB+空载体组与PDGF?BB组比较差异均无统计学意义(P均>0.05).Western blot结果显示, PDGF?BB组细胞Glut1及HK2、PFKFB3的蛋白表达水平均高于空白对照组(P均<0.05),PDGF?BB+SIRT3过表达组则均低于PDGF?BB组(P均<0.05),PDGF?BB+空载体组与PDGF?BB组比较差异均无统计学意义(P均>0.05).结论 PDGF?BB通过SIRT3促进有氧糖酵解,进而调控PASMC表型转化.
肺动脉、肌细胞、平滑肌、糖酵解、血小板衍生生长因子、SIRT3
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R59;R73
国家自然科学基金81400208;江苏省自然基金BK20181227;镇江市社会发展基金SH2018043 Fund programs: National Natural Science Foundation of China81400208;Natural Foundation of Jiangsu ProvinceBK20181227;Zhenjiang Science and Technology Support ProgramSH2018043
2020-01-11（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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