10.3760/cma.j.issn.0253-3758.2013.06.014
环孢菌素A-纳米乳预处理抑制猪脂肪组织来源干细胞的凋亡
目的 通过与环孢菌素A(CsA)比较,评估环孢菌素A-纳米乳(CsA-NP)预处理保护猪脂肪组织来源干细胞(ASC)抗凋亡作用及可能机制.方法 采用过氧化氢(H2O2)体外诱导ASC凋亡模型,将ASC细胞分为6组:对照组(无特殊干预),单纯H2O2组,CsA或CsA-NP 0.1 mg/ml+H2O2组,CsA或CsA-NP 1.0 mg/ml+H2O2组,CsA或CsA-NP 5.0 mg/ml+H2O2组,CsA或CsA-NP10.0 mg/ml+H2O2组.观察凋亡细胞形态并计算凋亡率,用流式细胞仪检测ASC细胞凋亡,用细胞计数CCK-8试剂检测细胞活性,分光光度法检测半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(caspase-3)活性,蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测细胞色素C表达.结果 细胞形态和生化检测结果显示,采用H2O2(100 μmol/L)能诱导ASC细胞凋亡,但添加CsA或CsA-NP(0.1 ～ 10.0 mg/ml)预处理后细胞凋亡率均明显下降(P＜0.01),其中又以5 mg/ml浓度组下降最多(与单纯H2O2比较,CsA:10.6％±2.8％比25.2％±3.8％；CsA-NP:6.2％ ±2.6％比25.2％±3.6％；P均＜0.01).与CsA相同浓度组比较,CsA-NP组在1 mg/ml(8.4％±3.2％比12.1％±3.2％,P＜0.05)和5mg/ml (6.2％±2.6％比10.6％±2.8％,P＜0.05)细胞凋亡率较低；添加CsA或CsA-NP (0.1 ～10.0 mg/ml)预处理后细胞存活率均明显高于单纯H2O2组(P＜0.01).同时检测CsA或CsA-NP保护细胞抗凋亡的可能机制,与单纯H2O2组比较,CsA或CsA-NP (0.1 ～10.0 mg/ml)预处理后可下调caspase-3活性；与CsA组比较,CsA-NP组在5 mg/ml浓度下调作用更为明显(1.42％±0.12％比1.68％±0.18％,P＜0.05).Western blot结果显示添加CsA或CsA-NP(5mg/ml)可完全抑制H2O2诱导的细胞色素C释放.结论 CsA-NP预处理能保护ASC抗凋亡,可能机制是减轻细胞凋亡率,提高细胞存活率,下调caspase-3活性和抑制细胞色素C释放.
干细胞、环孢菌素、细胞凋亡、纳米粒子
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R73;R3;R285.5
国家高技术研究发展计划（863计划）2006AA02A105
2013-08-06（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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