10.3877/cma.j.issn.2095-3216.2016.06.004
XBP1s 条件性过表达定点敲入小鼠模型的建立
目的:获得可进行条件性过表达 XBP1s 基因的 Rosa 26定点敲入杂合子小鼠。方法通过 In-Fusion Cloning 的方法构建胚胎干细胞(ES 细胞)打靶载体,并进行线性化,电转染 JM8A3 ES细胞。药物筛选获得抗性 ES 细胞克隆,经长片段 PCR 鉴定获得正确同源重组的阳性克隆。阳性 ES细胞经克隆扩增后,注射入 C57BL/6J 小鼠的囊胚中,获得嵌合鼠,筛选出高比例嵌合小鼠与野生型C57BL/6J 小鼠交配后获得阳性 F1代小鼠,并分别进行 PCR 和测序鉴定。结果经酶切鉴定证明打靶质粒构建成功,经胚胎干细胞打靶共获得144个抗性 ES 细胞克隆,通过长片段 PCR 的方式对同源重组阳性克隆进行筛选和克隆经测序确认,共获得21个正确同源重组的阳性克隆。阳性 ES 细胞克隆 E3、C6经扩增后注射 C57BL/6J 小鼠囊胚96个,通过胚胎移植,共获得2只高嵌合雄鼠,与野生型C57BL/6J 小鼠交配后获得3只 F1代杂合小鼠,经 PCR 及测序鉴定正确。结论成功建立了 XBP1s基因的 Rosa26定点敲入 F1代杂合子小鼠,为未来获得免疫细胞、肾脏固有细胞及腹膜间皮细胞XBP1s 条件性敲入小鼠奠定了基础。
XBP1s、非折叠蛋白反应/内质网应激、同源重组、基因打靶、条件性基因敲入
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R4 ;R37
国家自然科学基金81470993;81272621;百特公司腹膜透析专项课题CHN-RENAL-IIS-2012-039;西京医院新技术新业务XJGX15Y45。
2017-03-03(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)
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