10.3877/cma.j.issn.2095-3216.2014.05.007
Klotho基因超甲基化在硫酸吲哚酚诱导的血管平滑肌细胞成骨转化中的作用机制
目的：从细胞层面探讨Klotho基因超甲基化在硫酸吲哚酚（IS）诱导的血管平滑肌细胞成骨转化中的作用和相关机制。方法体外培养人主动脉血管平滑肌细胞（HASMC），以IS按0、200、500、1000μmol ／L的浓度梯度干预6 d，采用茜素红染色观察钙盐沉积，Real-time 聚合酶链式反应（PCR）和Western 印迹检测平滑肌细胞肌动蛋白α（α-SMA）、smoothin、骨桥蛋白（OPN）、碱性磷酸酶（ALP）、核结合因子α1（Cbfα1）、Klotho和不同DNA甲基化转移酶（DNMT）的mRNA和蛋白表达水平，同时利用焦磷酸测序方法检测HASMC的Klotho基因甲基化率；在IS 1000μmol／L组培养基中加入不同浓度梯度的5-氮杂脱氧胞苷（5Aza-2dc）进行干预，观察茜素红染色、各基因表达水平和Klotho基因甲基化率的改变。组间均数比较采用独立样本t检验，组间率的比较采用卡方检验。结果IS 1000μmol／L组HASMC细胞外基质呈红色，细胞结节处浓染，为钙盐沉积染色阳性。IS可以下调HASMC的α-SMAmRNA和蛋白及 smoothin 表达水平，上调OPN、ALP的mRNA和蛋白表达水平，使HASMC逐渐丧失平滑肌细胞表型而发生成骨转化。与对照组比较，IS 200、500、1000μmol ／L刺激6 d可显著升高HASMC的Klotho基因甲基化率（9±1％与4±0．7％，t＝5．38，P ＜0．01；18±1．3与4±0．7％，t＝6．92，P＜0．01；41±2％与4±0．7％，t＝9．26，P＜0．001）。IS 500、1000μmol ／L可显著下调HASMC 的Klotho mRNA和蛋白表达水平。同时IS 1000μmol ／L可显著上调 HASMC 的DNMT1 mRNA和蛋白表达水平。5Aza-2dc 10μmol ／L干预可减轻IS诱导的细胞外钙盐沉积，上调α-SMA蛋白、smoothin表达水平并下调Cbfα1蛋白表达水平，同时减低HASMC的Klotho基因甲基化率（20±1％与41±2％，t＝6．98，P＜0．01）、上调HASMC的Klotho 蛋白表达水平。结论 IS可通过上调血管平滑肌细胞DNMT表达，启动 Klotho 基因超甲基化，进而下调 Klotho 基因转录和表达，诱导血管平滑肌细胞成骨转化。
Klotho基因、脱氧核糖核酸甲基化、硫酸吲哚酚
国家科技支撑计划项目2011BAI10B03；上海市科学技术委员会基金142R1406400；上海市卫计委青年医师资助培养计划
2015-03-06（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
共7页
255-261
