10.3969/cma.j.issn.1674-3253.2010.03.018
克隆与表达产甲酸草酸杆菌代谢基因Frc及临床意义
目的 研究产甲酸草酸杆菌草酸代谢基因Frc转化大肠杆菌BL21后稳定表达代谢草酸相关性酶--甲酰辅酶A转移酶(FCoAT)对草酸的降解效能.方法 成功培养产甲酸草酸杆菌后,采用PCR方法从产甲酸草酸基因组中获得Frc基因,克隆到pMDTM19-T载体上进行测序,得到正确的基因片段.经双酶切将目的 基因片段插入到原核表达载体PGEX-4T-2上,测序正确后,转化大肠杆菌BL-21,IPTG诱导表达GST-FCoAT融合蛋白,表达产物行western-blot鉴定分析.结果 重组克隆载体pMDTM19-Frc经测序鉴定序列正确.成功构建融合原核表达质粒PGEX-4T-2-Frc,大肠杆菌BL21成为载体,并稳定表达可溶性融合蛋白GST-FCoAT的同时获得代谢草酸潜能.结论 克隆产甲酸草酸杆菌Frc基因,成功构建PGEX-4T-2-Frc载体,并转化大肠杆菌BL21,能稳定表达可溶性融合蛋白GST-FCoAT,具有代谢草酸潜能,为肠道细菌获得代谢草酸潜能,减少胃肠道内草酸的吸收,降低尿液中草酸含量和临床防治草酸结石的研究奠定理论基础.
产甲酸草酸杆菌、Frc、基因克隆、大肠杆菌BL-21
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R5 ;R73
国家自然基金资助项目30801140 ,广东省科技厅资助项目2009B080701026;广州市卫生局资助项目2008-YB-153
2010-07-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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239-244
