10.3760/cma.j.issn.0412-4030.2013.06.007
神经纤毛蛋白-1及血管内皮生长因子促HaCaT细胞增殖的研究
目的 探讨神经纤毛蛋白-1(neuropilin-1,NRP-1)和细胞外调节蛋白激酶(ERK)在血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)促HaCaT细胞增殖中的可能机制.方法 培养HaCaT细胞,转染NRP-1质粒EX-O0008-M02,采用逆转录(RT)-PCR法检测转染后NRP-1 mRNA表达,蛋白免疫印迹法检测NRP-1蛋白质表达.将部分培养的HaCaT细胞分为脂质体对照组、对照质粒组以及目的质粒组分别予以脂质体、对照质粒pReceiver-M02及目的质粒EX-O0008-M02转染,各组分别加入PBS、MEK1/2抑制剂(U0126)、VEGF或U0126联合VEGF进行处理后,噻唑蓝(MTT)法检测HaCaT细胞增殖的改变,蛋白免疫印迹法观察ERK1/2的磷酸化情况以及增殖细胞核抗原(PCNA)的表达情况.采用One-way ANOVA检验组间差异,LSD法进行多重比较和校正.结果 RT-PCR和蛋白免疫印迹实验结果提示EX-O0008-M02质粒转染可有效促进HaCaT细胞NRP-1 mRNA及其蛋白质的表达.与脂质体对照组(A570值0.63±0.07)及对照质粒组(A570值0.62±0.13)比较,目的质粒组HaCaT细胞增殖活性(A570值0.88±0.14)明显增强,F=8.755,P＜0.05.与对照质粒VEGF刺激组(A570值0.88±0.10)比较,目的质粒VEGF刺激组HaCaT细胞的增殖活性(A570值1.14±0.18)亦明显增强,F=4.591,P＜0.05.与目的质粒VEGF刺激组比较,U0126预处理可以明显抑制VEGF对HaCaT细胞的促增殖作用(A570值0.50±0.13,F=42.106,P＜0.01).蛋白免疫印迹结果提示与对照质粒转染细胞比较,目的质粒转染后VEGF对HaCaT细胞ERK1/2的促磷酸化及促PCNA表达得到明显提高,然而此作用可以被U0126有效抑制.结论 ERK1/2信号通路的激活在NRP-1蛋白介导的VEGF促HaCaT细胞增殖作用中可能发挥关键性作用.
神经纤毛蛋白质1、角蛋白细胞、血管内皮生长因子类、糖尿病足
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浙江省省级科技项目2009C33140
2013-09-24（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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