10.3760/cma.j.issn.1000-6680.2018.02.006
人类免疫缺陷病毒-1vpr基因沉默后细胞凋亡及凋亡相关蛋白的表达研究
目的 通过RNA干扰HIV-1vpr基因的表达后观察凋亡相关蛋白c-凋亡抑制蛋白(inhibitor of apoptosis protein,IAP)2的表达情况,同时检测各组Jurkat细胞的凋亡情况.方法 将空载体(NC组)、HIV1 vpr质粒(vpr组)、vpr+磷酸化RNAT-U6.1/Neo-vpP56质粒(Si56组)、vpr+磷酸化RNAT-U6.1/Neo-vpr-160质粒(Si160组)分别转染Jurkat细胞并培养48 h,分别进行总RNA、蛋白提取,利用实时PCR检测vpr基因的表达,证实质粒转染成功,以实时PCR和蛋白质印迹法检测凋亡相关蛋白人类内源性抗凋亡蛋白(inhibitor of apoptosisprotein 2 c-IAP2)的表达情况,流式细胞仪检测各组Jurkat细胞的凋亡情况.结果 vpr组、Si56组、Si160组均可检测到vpr基因的表达,与vpr组比较,Si56组、Si160组HIV-1vpr基因表达的mRNA水平均出现明显降低,分别下降82.2％、87.2％,差异均有统计学意义(均P＜0.05).与NC组比较,vpr组、Si56组及Si160组c-IAP2基因表达的mRNA水平明显升高,分别为NC组的3.75、2.49、2.65倍;但Si56组、Si160组c-IAP2基因表达的mRNA水平均低于vpr组,分别下降33.7％和29.5％;蛋白质印迹法检测显示,c-IAP2蛋白表达水平与mRNA结果一致,其中Si56组、Si160组c-IAP2蛋白表达水平比vpr组分别下降42.2％和46.8％(均P＜0.05).NC组、vpr组、Si56组和Si160组均可检测到Jurkat细胞凋亡,与NC组比较,vpr组细胞凋亡率明显升高,为NC组的1.76倍,而Si56组和Si160组细胞凋亡率与NC组比较差异无统计学意义(均P＞0.05);与vpr组比较,Si56组和Si160组细胞凋亡率明显降低,分别为19.26％和18.05％ (P＜0.05).结论 通过沉默HIV-1vpr基因可下调Jurkat细胞c-IAP2基因的转录和蛋白表达水平,抑制Jurkat细胞的凋亡.
HIV-1、细胞凋亡、RNA干扰、HIV-1vpr基因、c-IAP2
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湖南省发改委科研计划项目湘财企指2015-83;湖南省卫计委《关于艾滋病防治项目》经费湘财企指2015-123Development and Reform Commission of Hu'nan Provincial Research Project2015-83;Health and Family Planning Commission of Hu'nan Provincial AIDS Prevention Programs2015-123
2018-08-13（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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