10.3760/cma.j.issn.1000-6680.2017.03.006
细胞因子信号转导抑制蛋白1过表达的树突状细胞对急性肝功能衰竭小鼠的治疗作用及机制研究
目的 研究细胞因子信号转导抑制蛋白1(SOCS1)过表达对DC功能的影响及对急性肝衰竭小鼠的治疗作用.方法 利用SOCS1过表达的慢病毒或阴性对照病毒以感染复数(MOI)=50转染C57BL/6小鼠骨髓来源树突状细胞(BMDC),96 h后转染成功的DC分别标识为SOCS1过表达的DC(DC-SOCS1)和阴性对照慢病毒转染的DC(DC-VNG).脂多糖(1 mg/L)刺激成熟后收集DC做表面分子流式检测,混和淋巴实验、蛋白质印迹法检测JAK/STAT 通路蛋白表达变化.90只6~7周龄健康雄性C57BL/6小鼠分成正常组12只,急性肝功能衰竭组26只,急性肝功能衰竭DC-SOCS1治疗组26只,急性肝功能衰竭DC-VNG治疗组26只,分别通过尾静脉注射0.9%氯化钠溶液、重悬于0.9%氯化钠溶液中的DC-VNG和DC-SOCS1,12 h后利用腹腔注射脂多糖(10 μg/kg)联合D-GalN(600 mg/kg)诱导小鼠急性肝功能衰竭模型建立.观察各组小鼠死亡率和各组肝脏病理表现,检测各组小鼠外周血ALT和AST水平,检测脾脏Treg比例.样本均数比较采用单因素方差分析,分类资料比较使用卡方检验.进行正态性检验和方差齐性分析,方差齐性采用LSD检验.结果 混合淋巴实验结果显示,混合培养比为100∶1的DC-SOCS1组刺激T淋巴细胞的增殖率为(25.87±0.38)%,低于10∶1的mDC组[(84.29±3.25)%],差异有统计学意义(x2=49.821,P<0.01);IL-10细胞因子浓度高于10∶1的mDC组,差异有统计学意义(F=20.112,P<0.05);IL-6细胞因子浓度明显低于10∶1的mDC组,差异有统计学意义(F=47.718,P<0.05).与imDC比较,脂多糖刺激成熟后的mDC、DC-VNG、DC-SOCS1组的JAK2表达量(t值分别为0.525、0.523和0.489,均P<0.01)、STAT1表达量(t值分别为0.442、0.400和0.402,均P<0.01)、SOCS1表达量(t值分别为0.322、0.363和1.090,均P<0.01)都明显升高,差异均有统计学意义.其中DC-SOCS1细胞的磷酸化信号转导因子和转录激活因子1(p-STAT1)、磷酸化Janus激酶2(p-JAK2)的表达量与mDC相比明显降低,差异均有统计学意义(t值分别为-3.840和0.254,均P<0.01).肝脏病理切片显示,DC-SOCS1治疗组的肝细胞死亡和炎性细胞浸润少于急性肝功能衰竭组和DC-VNG治疗组,并伴有较高的Treg比例.急性肝功能衰竭DC-SOCS1治疗组生存率高于急性肝功能衰竭组,差异有统计学意义(x2=12.87,P<0.05).结论 SOCS1基因通过负向调控JAK2/STAT1通路的信号转导从而抑制DC的成熟过程,SOCS1过表达的DC生物功能表现与调节性树突状细胞相似,可以增加小鼠体内Treg的比例,抑制肝脏过强的免疫反应,调节免疫平衡,对急性肝功能衰竭小鼠有明显治疗效果.
肝功能衰竭、急性、细胞因子信号转导抑制蛋白1、树突细胞
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R57;R73
温州市科技计划项目Y20140669;中国肝炎防治基金会天晴肝病研究基金TQGB20150109 The Science and Technology Planned Projects of Wenzhou CityY20140669;Tian Qing Liver Disease Research FundTQGB20150109
2017-06-02（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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