10.3760/cma.j.issn.1000-6680.2017.02.015
尿液中检出迟钝爱德华菌一例
患者女,89岁,因膀胱肿瘤、右肾积水于2012年1月30日收住于宁波市第一医院泌尿外科,尿培养示迟钝爱德华菌>100 000 cfu/mL,予氨曲南2.0 g每天两次治疗.2012年2月5日复查尿培养,无细菌、真菌生长,提示尿路感染治愈.用VITEK-2细菌鉴定仪及配套革兰阴性菌鉴定卡鉴定菌种,标准菌株为产酸克雷伯菌ATCC700324. 挑纯培养菌落置入0.5 mL离心管内(内预置200 μg/L蛋白酶K溶液200 μL,56 ℃水浴2 h,改95 ℃水浴10 min,15 000 r/min(离心半径8 cm)离心30 s.上清液即为基因检测的模板液,-20 ℃冰箱保存备用.分子鉴定采用PCR法检测管家基因gyrA.靶基因引物识别序列P1: 5′-CAGGTAGTAGTGACCGTCAC-3′;P2: 5′-AAGCGTGTCGAAGGCATCAG-5′;目的产物长度501 bp.靶基因PCR扩增体系均为每反应体系P1引物1 μL (1.0 μmol/L)、P2引物1 μL(1.0 μmol/L),核苷三磷酸(dNTP) 2 μL(2 mmol/L),10倍缓冲液2 μL[KC1 10 mmol/L,(NH4)2SO4 8 mmol/L,MgC12 2 mmol/L,Tris-HCl(pH值为9.0)10 mmol/L,乙基-苯基-聚乙二醇(NP)40 0.5%,牛血清蛋白(BSA)0.02%],Taq DNA聚合酶1 U(不计体积),超纯水9 μL,模板液5 μL,总反应体积20 μL.PCR扩增热循环参数为:93 ℃预变性2 min;然后93 ℃ 30 s,55 ℃ 30 s,72 ℃ 60 s,循环35周期;72 ℃延长5 min.产物经2%琼脂糖凝胶电泳,出现与阳性对照分子相当的目的条带为阳性.
尿液、爱德华、细菌鉴定仪、琼脂糖凝胶电泳、引物、尿培养、离心、产酸克雷伯菌、靶基因、热循环参数、牛血清蛋白、核苷三磷酸、革兰阴性菌、真菌生长、阳性对照、体积、水浴、尿路感染、模板、泌尿外科
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R51;R44
2017-05-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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