10.3760/cma.j.issn.1000-6680.2016.12.004
骨髓间充质干细胞在不同培养体系中对肝星状细胞的影响及其潜在机制研究
目的：探讨骨髓间充质干细胞（BMMSC）在不同共培养体系与肝星状细胞（HSC）共培养后细胞因子及 TLR4通路表达的变化。方法将分离提纯的 HSC 分别经0、50、100、150μg／L 脂多糖处理48 h，细胞增殖（CCK）-8检测 HSC 增殖率以确定最佳浓度。在该脂多糖浓度下，2×105／mL HSC分为单纯培养组、1∶1与 BMMSC 直接共培养组和 Transwell 共培养组，检测各组上清液 IL-6、TNF-α。再将细胞分为无脂多糖下 BMMSC 组、HSC 组、脂多糖＋BMMSC 组、脂多糖＋HSC 组、Transwell HSC组、Transwell 所有细胞组、直接共培养所有细胞组，用实时荧光定量 PCR 检测各组α-肌动蛋白（α-SMA）和Ⅰ型胶原 mRNA 表达水平，用蛋白质印迹法检测 TLR4、髓样分化因子88（MyD88）、核因子-κB 蛋白表达。各样本均数比较采用单因素方差分析。结果与无脂多糖相比，HSC 在50、100、150μg／L 脂多糖浓度下增殖率分别为（129．77±11．26）％、（162．90±13．15）％、（55．12±11．6）％，差异均有统计学意义（t 值分别为5．91、10．70和8．65，均 P ＜0．05）。单纯 HSC 组 IL-6和 TNF-α浓度分别为（252．02±30．94）ng／L、（148．00±10．27）ng／L，直接共培养组分别为（88．52±6．61）ng／L、（72．63±5．54）ng／L， Transwell 共培养组分别为（103．76±7．14）ng／L、（81．79±6．92）ng／L，直接共培养组和 Transwell 组与单纯 HSC 组比较差异有统计学意义（t 值分别为12．66、15．82和11．81、12．34，均 P ＜0．05）。直接共培养组与间接共培养组相比差异有统计学意义（t 值分别为3．83、2．53，均 P ＜0．05）。与无脂多糖组相比， HSC 在脂多糖中的α-SMA 和Ⅰ型胶原表达均有明显增加，差异均有统计学意义（t 值分别为14．16、11．84，均 P ＜0．05）。经与 BMMSC Transwell 共培养后，Transwell HSC 组的α-SMA 和Ⅰ型胶原表达均有显著降低，差异均有统计学意义（t 值分别为11．98、4．47，均 P ＜0．05）。Transwell 所有细胞组与直接共培养组相比，α-SMA 和Ⅰ型胶原表达增加，差异均有统计学意义（t 值分别为3．70、3．19，均 P ＜0．05）。脂多糖＋HSC 组与 HSC 组相比，TLR4、MyD88、核因子-κB 的蛋白表达均有上升，而 Transwell HSC 组各蛋白较脂多糖＋HSC 组有明显下降，且 Transwell 所有细胞组与直接共培养组相比各蛋白表达升高，差异均有统计学意义（均 P ＜0．05）。结论 BMMSC 对 HSC 激活及其相关炎性细胞因子分泌有抑制作用，可能是通过 TLR4通路及细胞间接触产生作用。
间质干细胞、肝星状细胞、肝硬化、Toll 样受体、共培养体系
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R73;R39
国家自然科学基金81570514、81500477；浙江省自然科学基金LY15H030017、LQ15H030006；温州市科技局Y20150014；北京医学奖励基金YJHYXKYJJ-162；王宝恩肝纤维化研究基金xjs001；中华医学会科研项目15030230611；温州市终末期肝病的预警与干预治疗科技创新团队C20150005
2017-03-17（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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