10.3760/cma.j.issn.1000-6680.2016.11.008
D型沙眼衣原体多形外膜蛋白I的分段克隆表达及其免疫原性分析
目的获得 D型沙眼衣原体多形外膜蛋白（Pmp ）I的全长（PmpI‐FL ）和羧基端蛋白（PmpI‐C），并鉴定蛋白免疫原性。方法用PCR扩增目的基因PmpI‐FL和PmpI‐C ，分别将其定向插入原核表达载体pGEX‐6P‐1中，连接产物转化入大肠埃希菌DH5α，提取质粒进行酶切、PCR、测序鉴定。再将重组质粒分别转化入大肠埃希菌BL21并诱导表达，考马斯亮蓝染色和免疫印迹鉴定目的蛋白，谷胱甘肽巯基转移酶（GST ）磁珠分别纯化PmpI‐FL‐GST融合蛋白和PmpI‐C‐GST 融合蛋白。用纯化后的蛋白分别免疫BALB／c小鼠，ELISA测定抗体效价。结果克隆目的基因 PmpI‐FL和 PmpI‐C的长度分别为2659和1195 bp ，序列均与基因库中一致，考马斯亮蓝染色和免疫印迹显示目的蛋白相对分子质量分别约为122000和69000；并得到纯化的蛋白。免疫小鼠所得血清经ELISA检测多克隆抗体效价达1∶12800（抗PmpI‐FL）和1∶6400（抗PmpI‐C）。结论成功表达具有强免疫原性的PmpI‐FL‐GST和PmpI‐C‐GST两种融合蛋白，为进一步研究其功能奠定基础。
衣原体、沙眼、多形外膜蛋白、PmpI、基因表达、免疫原性
34
R37;R75
国家自然科学基金资助项目31100138、31570178；天津市自然科学基金资助项目16JCQNJC11100Found ProgramNational Nature Science Foundation of China 31100138，31570178；Tianjin Nature Science Foundation of China16JCQNJC11100
2017-02-16（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
共5页
675-679
