10.3760/cma.j.issn.1000-6680.2016.07.003
人类免疫缺陷病毒-1 vpr基因干扰RNA载体构建及筛选的体外研究
目的 筛选鉴定针对HIV-1 vpr基因的小干扰RNA(siRNA)干扰片段,探讨siRNA对HIV-1 vpr基因的干扰效率.方法 根据siRNA设计要求合成针对HIV-1 vpr靶点的2段寡核苷酸片段,并构建相应载体,转染含HIV-1 vpr质粒的HEK293T细胞.设2个实验组(siRNA56、siRNA160组),1个阴性对照组(NC组),空白HEK293T细胞为对照组(Con组).各组分别进行总RNA、蛋白提取,实时PCR和蛋白质印迹分别从核酸和蛋白水平验证有效的靶向HIV-1 vpr的siRNA片段.ELISA检测各组培养细胞上清液中IL-17、γ干扰素水平.结果 DNA测序结果表明成功构建了哺乳动物细胞pRNAT-U6.1/Neo-Vpr-56/160(siRNA56和siRNA160)表达载体.siRNA56和siRNA160干扰使HIV-1 vpr基因在mRNA水平的表达分别下降69.0％和76.1％;在蛋白表达水平分别下降76.3％和86.5％.Con组、NC组、siRNA56组和siRNA160组细胞培养上清液中IL-17分别为(1.936±0.415)、(1.815±0.393)、(1.935±0.356)和(2.034±0.421) pg/mL;γ干扰素分别为(1.673±0.234)、(1.648±0.332)、(2.169±0.362)和(2.301±0.4125) pg/mL.结论 表达pRNAT-U6.1/Neo-vpr-56/160(siRNA56和siRNA160)的质粒构建成功,针对不同基因片段的siRNA均可以下调HIV-1 vpr的表达水平.
人类免疫缺陷病毒-1、基因,vpr、RNA干扰、白细胞介素17、干扰素Ⅱ型
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湖南省科学技术厅计划项目2014SK3097;湖南省发改委科研计划项目2015-83Hunan Provincial Science and Technology Department2014SK3097;Development and Reform Commission of Hunan province2015-83
2016-09-26（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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