10.3760/cma.j.issn.1000-6680.2015.06.009
外周血单个核细胞介导乙型肝炎病毒感染的transwell 小室体外模型研究
目的：观察感染 HBV 的 PBMC 经人绒毛膜癌滋养层细胞（Bewo 细胞）构建的胎盘屏障迁移情况，探讨 PBMC 作为载体转运 HBV 的生物学作用。方法培养并用细胞计数试剂盒-8检测培养 Bewo 细胞和 PBMC 的增殖和活性。用 HBV DNA 含量为5×106拷贝／mL 的乙型肝炎患者血清100μL 感染 PBMC 后，用羟基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺脂（CFSE）荧光染料标记感染的细胞， transwell 小室建立 Bewo 细胞和感染 HBV 的 PBMC 共培养模型。用流式细胞仪检测感染 HBV 的PBMC 迁移情况，荧光定量 PCR 法检测 transwell 下室中 PBMC HBV DNA 含量。结果 PBMC、Bewo细胞均在接种24 h 左右开始增殖，120 h 左右开始进入生长停滞期。transwell 小室共培养0、12、24和48 h，下室中绿色荧光标记的 PBMC 量分别为（0．445±0．021）％、（21．180±4．653）％、（34．830±7．156）％和（64．185±3．161）％，随着培养时间的延长，下室中检测到的标有绿色荧光的 PBMC 量越多（F ＝68．983，P ＝0．001）。共培养24、48 h 时，下室 PBMC HBV DNA 分别为（1．925±0．431）×103、（2．565±0．361）×103拷贝／mL，即下室中的 PBMC 发生感染。结论 PBMC可以作为 HBV 肝外感染的靶细胞，利用 transwell 小室构建胎盘滋养层屏障可以为体外研究 HBV 跨胎盘传播提供新思路。
肝炎病毒、乙型、外周血单个核细胞、Bewo 细胞、Transwell小室
R18;R51
国家自然科学基金资助项目30901227；山西省基础研究项目青年科技研究基金，2011021038-3；山西医科大学博士启动基金资助项目B03201208
2015-08-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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