10.3760/cma.j.issn.1000-6680.2014.11.004
表达乙型肝炎表面抗原及前 S2蛋白120~146片段重组酵母菌的构建及全菌体免疫效应评价
目的:构建表达 HBsAg 及前 S2蛋白120~146片段(PreS2120-146)-HBsAg 的重组酵母菌,并评价其全菌体免疫效应。方法根据酵母密码子偏爱性优化 PreS2120-146区及 HBsAg 基因序列,串联后克隆到毕赤酵母 pPIC3.5K 表达载体,构建 pPIC3.5K/PreS2120-146-HBsAg 质粒,重组质粒经 BgkⅡ酶切线性化后,电转化至 GS115菌株中,筛选 PreS2120-146-HBsAg 重组毕赤酵母,通过 SDS-PAGE、Western 印迹、ELISA 分析目的蛋白的表达;以表达目的蛋白的灭活酵母全菌体免疫 BALB/c 小鼠,采用 ELISA 检测其产生的 HBsAg 特异性抗体;以 HBsAg CTL 表位肽刺激免疫小鼠脾细胞,通过实时PCR 检测γ干扰素表达,分析其诱导的 CTL 反应。采用独立样本 t 检验。结果PCR、酶切和测序分析表明成功构建了 pPIC3.5K/PreS2120-146-HBsAg 重组质粒。重组毕赤酵母甲醇诱导后,SDS-PAGE、Werstern 印迹和 ELISA 证实 PreS2120-146-HBsAg 目的蛋白表达。与 HBsAg 纯抗原免疫比较,灭活重组酵母菌免疫小鼠产生抗 HBsAg 特异性 IgG 抗体水平相当(t=0.946,P =0.381)。CTL 反应检测显示, HBsAg CTL 表位肽刺激灭活重组酵母菌免疫组小鼠的脾细胞产生更高水平的γ干扰素(t=2.305,P =0.044)。结论利用整合型重组毕赤酵母表达系统成功表达了 PreS2120-146-HBsAg 目的蛋白,全菌体免疫小鼠后能诱导产生特异的体液免疫和细胞免疫反应。
肝炎表面抗原、乙型、PreS2、毕赤酵母、免疫反应
TQ4;R73
国家自然科学基金资助项目81001343;浙江省自然科学基金资助项目Y2100909;温州市科技局资助项目Y20120159
2014-12-30(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)
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