10.3760/cma.j.issn.1000-6680.2014.11.002
乙酰化酶基因 RNA 干扰文库的构建及其对 HepG2．2．15细胞的感染
目的：构建人类基因组中16个组蛋白乙酰化酶的短发夹 RNA（shRNA）慢病毒载体文库，为进一步探索表观遗传学基因在 HBV 调控中的作用机制提供有利工具。方法根据 shRNA 引物设计原则，针对每个基因选择8对确保干扰效率的 shRNA 序列（A～H），将引物退火后连接至 shRNA空慢病毒载体上转化，PCR 法验证菌落克隆，确认阳性克隆；对质量合格的质粒再进行单切酶验证。分别将同一基因的4个 shRNA 慢病毒质粒混合，分别包装病毒。293T 细胞转染48 h 和72 h 后收集病毒粗液，感染 HepG2．2．15细胞。感染72 h 后用荧光显微镜观察并评估荧光细胞比例。结果针对16个乙酰化酶基因，构建128个慢病毒载体 RNA 干扰（RNAi）文库，72 h 后慢病毒感染 HepG2．2．15细胞的效率＞80％。结论成功构建16个组蛋白乙酰化酶的 shRNA 慢病毒载体，从而为研究人组蛋白乙酰化酶对 HBV 复制的影响奠定了坚实的基础。
肝炎病毒、乙型、病毒复制、组蛋白酰基转移酶、短发夹 RNA、RNA 干扰
R73;R97
国家自然科学基金资助项目81070334；上海市公共卫生优秀学科带头人培养计划资助项目GWDTR201202；十二五“艾滋病和病毒性肝炎等重大传染病防治”科技重大专项课题2012ZX10005004-002；上海市卫生和计划生育委员会重点课题20134004；上海市科委科技支撑项目13401902900
2014-12-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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