10.3760/cma.j.issn.1000-6680.2014.07.003
热休克蛋白47-短发夹RNA对日本血吸虫肝纤维化小鼠的体内干预研究
目的：观察热休克蛋白47-短发夹 RNA （HSP47-shRNA）干预对日本血吸虫肝纤维化小鼠模型的抗纤维化作用，探讨 HSP47在血吸虫肝纤维化中的相关机制。方法雌性 SPF 级 BALB/c J小鼠72只，60只经腹部皮肤感染日本血吸虫尾蚴（16±1）条/只，建立血吸虫肝纤维化小鼠模型，另12只小鼠为未感染对照组。按随机数字表法将60只经造模的小鼠均分成1 mg/kg HSP47-shRNA 质粒干预组、2 mg /kg HSP47-shRNA 质粒干预组、4 mg/kg HSP47-shRNA 质粒干预组、非相关对照shRNA 质粒干预组和感染对照组，每组12只。 HSP47-shRNA 干预组小鼠按浓度梯度，于感染第6～14周，每周1次经尾静脉高压注射；非相关对照 shRNA 质粒干预组于相同时间点注射2 mg/kg 非相关shRNA 质粒。以感染第14周为干预终点，观察各组小鼠生存率、肝脏和脾脏大体形态及肝组织病理学改变。实时 PCR 和 Western 印迹法检测 HSP47 mRNA 和蛋白表达。实时荧光 PCR 检测Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、基质金属蛋白酶抑制因子-1（TIMP-1）、基质金属蛋白酶-9（MMP-9）、纤溶酶原激活物抑制物-1（PAI-1）、转化生长因子-β1（TGF-β1）、结缔组织生长因子（CTGF）、IL-13、IL-17 mRNA 的变化。两组间均数比较采用 Student-t 检验。结果 HSP47-shRNA 体内干预主要定位于小鼠肝星状细胞。1、2、4 mg/kg HSP47-shRNA 质粒干预组小鼠至第14周分别存活4、3、3只，其中4 mg/kg HSP47-shRNA质粒干预组与感染对照组（存活2只）比较，差异有统计学意义（χ2＝4．168，P ＝0．043）。4 mg/kg HSP47-shRNA 干预组和感染对照组小鼠肝组织 HE 染色均可见慢性肉芽肿改变，虫卵周围包绕梭形胶原纤维，并有炎性细胞浸润；Masson 和天狼星红-苦味酸染色提示4 mg/kg HSP47-shRNA 干预组肝内胶原沉积较感染对照组减轻（t＝3．191，P ＝0．039）。干预组 HSP47 mRNA 和蛋白水平下调的同时，Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、TIMP-1、PAI-1、TGF-β1、CTGF 、IL-13和 IL-17 mRNA 较感染对照组均显著下调（均 P＜0．01），MMP-9 mRNA 则明显升高（P＜0．01）。结论 HSP47-shRNA干预日本血吸虫小鼠肝纤维化模型可沉默 HSP47表达，并明显改善肝纤维化。通过上调 MMP-9、下调 PAI-1从而促进胶原降解及影响相关细胞因子表达，可能是 HSP47-shRNA 抗纤维化机制之一。
HSP47 热休克蛋白质类、短发卡 RNA、血吸虫病、日本、细胞外基质、细胞因子类
R73;R5
湖北省血吸虫防治资助项目XF2010-15，XF2012-17；百洋肝纤维化基金资助项目2010-009
2014-08-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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