10.3760/cma.j.issn.1000-6680.2011.10.006
丙型肝炎病毒全长基因嵌合萤光素酶重组质粒转染细胞系的建立与初步应用
目的 构建能产生较高效价重组病毒的HCV细胞感染模型,为HCV致病机制的研究和抗病毒药物的筛选提供一个有效的体外细胞培养系统.方法 利用PCR技术在HCV NS5A C端插入海肾萤光素酶( Renilla Luciferase,Rluc)报告基因,并引入能提高HCV效价的突变,酶切鉴定重组基因序列构建成功后,转染入肝癌细胞系Huh7.5,用细胞免疫荧光、免疫印迹法和萤光素酶活性分析检测病毒复制和感染水平.用IFNα鉴定该系统用于抗丙肝药物筛选的可行性.结果 在重组病毒JFH1-2440-Rluc RNA转染的细胞中可检测到Rluc的活性,而阴性对照JFH1-GND和野生株JFH1-wt RNA转染的细胞未检测到Rluc的活性,经连续传代,JFH 1-2440-Rluc RNA转染细胞所产生的病毒效价可达到1.5×104 FFU/mL,Rluc的活性随着IFNα浓度的增加而逐渐减低,呈现明显的剂量依赖特性.结论 构建的重组HCV-JFH1-Rluc报告基因系统具有经济、快速、敏感等优点,为抗HCV药物的筛选提供了有利平台.
肝炎病毒、丙型、萤光素酶类、基因、报告、细胞、培养的、质粒
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R512.62(传染病)
江苏省333工程BI A2010080
2012-03-06（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
589-592
