10.3760/cma.j.issn.1000-6680.2009.02.001
一种用于白念珠菌基因敲除的新型载体的构建
目的 探讨对抗生素Zeocin耐药作为一种新的筛选标记用于白念珠菌基因敲除的可行性.方法药物敏感试验检测在不同pH值下Zeocin对白念珠菌的最低抑菌浓度(MIC).PCR法扩增出Zeocin耐药基因--ZeoR,基因拼接方法构建出用于AAF1基因敲除的整合型载体pHS1-Zeo-HS2,并进行测序鉴定.氯化锂法将此整合型载体转化白念珠菌CAI4,对目的基因AAF1进行替换.Zeocin筛选出重组白念珠菌,提取重组菌基因组,用两组引物进行PCR扩增,进行遗传学鉴定.结果不同pH值下白念珠菌对Zeocin均敏感,并确定100 mg/L为筛选浓度.测序鉴定成功拼接出用于白念珠菌基因敲除的整合型载体.耐Zeocin重组白念珠菌使用PCR方法和测序鉴定,发现原AAF1基因已被ZeoR基因替代.结论成功构建可用于白念珠菌基因敲除的新型载体.
念珠菌、白色、Zeocin、基因敲除技术、微生物敏感性试验、重组、遗传
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R3(基础医学)
2009-04-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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