10.3760/j.issn:1000-6680.2007.01.009
慢性乙型肝炎患者外周血单个核细胞及肝组织中HBV cccDNA定量检测
目的 优化HBV共价闭合环状DNA(cccDNA)特异性定量检测方法,并观察HBV cccDNA在慢性乙型肝炎患者外周血单个核细胞(PBMC)及肝组织中的分布情况.方法 标本抽提核酸后,以不降解质粒的ATP依赖的DNA酶(PSAD)进行酶切,再以跨双缺口的特异性引物进行荧光PCR定量检测HBV cccDNA;用10份HBV高滴度(10(7)拷贝/mL)血清和梯度稀释的HBV克隆质粒标准品,验证此检测方法的特异度和灵敏度;取慢性乙型肝炎患者PBMC和肝组织穿刺标本各50份,检测其总HBV DNA和cccDNA.结果 10份血清标本均无假阳性cccDNA检测结果,灵敏度可达到10(3)拷贝/mL.所有PBMC中cccDNA检测均阴性;所有肝组织中总HBV DNA和cccDNA检测均阳性,总HBV DNA含量为3.19×10(2)～6.69×10(7)拷贝/μg人基因组DNA,cccDNA含量为7.32×10(0)～6.51×10(6)拷贝/μg人基因组DNA,同一患者肝组织中总HBV DNA含量是cccDNA含量的10.7倍至9.2×10(5)倍.结论 本方法特异度和灵敏度高.PBMC不能支持HBV的复制.在慢性乙型肝炎患者的肝组织中均可检测到cccDNA,但其水平并非与细胞内总HBV DNA水平正相关.
肝炎病毒、乙型、DNA、环状、单个核细胞、肝
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R5(内科学)
2008-03-03（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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