10.3760/j.issn:1000-6680.2005.04.004
人源抗-HBs轻链与干扰素-α融合蛋白的克隆及表达
目的构建人源单克隆抗-HBs Fab片段-IFN-α表达载体,对原核表达该融合蛋白的可行性及其效果进行实验研究.方法用聚合酶链反应(PCR)体外扩增目的基因IFN-α,单酶点插入已含人源抗-HBs Fab基因的载体,插入点位于轻链基因3'末端,利用酶切、PCR鉴定,测序筛选正确插入的阳性克隆,转化大肠埃希菌Top10,挑选单克隆表达、纯化目的蛋白,用酶联免疫吸附法(ELISA)检测融合蛋白的抗原性,用Dot-blot和WISH细胞检测其生物学活性.结果利用插入了人源抗-HBs Fab段基因及IFN-α基因的pBAD/gⅢA原核表达系统,成功表达了具生物活性的轻链与IFN-α的融合蛋白,其与HBsAg的亲合力与抗-HBs-Fab相近,而且具有干扰素的活性.融合蛋白对HepG2.2.15细胞初步实验结果亦显示出其具有良好的靶向性及致凋亡作用.结论轻链与干扰素IFN-α融合蛋白的成功表达表明,应用原核系统能够同时表达特异抗体和其介导的某些生物活性因子,不失为一种经济、有效的方法,为特异抗体及其介导融合蛋白的制备和临床应用提供了实验依据.
干扰素α、肝炎表面抗原、乙型、重组融合蛋白质类、HepG2.2.15细胞
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R5(内科学)
2005-11-24（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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