10.3760/j.issn:1000-6680.2002.04.007
截短型HBsAg中蛋白反式激活基因的克隆
目的应用抑制性消减杂交技术构建乙型肝炎病毒(HBV)截短型中蛋白(MHBst)反式激活基因差异表达的cDNA消减文库,克隆HBV截短型中蛋白反式激活相关基因.方法以HBV截短型中蛋白表达质粒pcDNA3.1(-)-Mt167转染HepG2细胞,以空载体pcDNA3.1(-)为对照;制备转染后的细胞裂解液,提取mRNA并逆转录为cDNA,经Rsa I酶切后,将实验组cDNA分成两组,分别与两种不同的接头衔接,再与对照组cDNA进行两次消减杂交及两次抑制性聚合酶链反应(PCR),将产物与T/A载体连接,构建cDNA消减文库,并转染大肠杆菌进行文库扩增,随机挑选克隆PCR扩增后进行测序及同源性分析. 结果成功构建人HBV截短型中蛋白反式激活基因差异表达的cDNA消减文库.文库扩增后得到94个白色克隆,进行菌落PCR分析,均得到200～800 bp插入片段.挑取50个插入片段测序,并通过生物信息学分析获得其全长基因序列,结果共获得23种编码基因,包括19种已知基因和4种未知基因.结论筛选到的cDNA全长序列,包括一些与细胞生长调节、免疫应答及肿瘤发生密切相关的蛋白编码基因,因此可能是HBV截短型中蛋白反式激活靶基因.
肝炎病毒、乙型、病毒蛋白质类、反式激活(遗传学)、抑制消减杂交、克隆、分子
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R3(基础医学)
军队科研项目98H038
2004-02-13（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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218-221
