10.13422/j.cnki.syfjx.20220609
复方黄柏液涂剂对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌毒力和生物膜的影响
目的:研究复方黄柏液涂剂(FFHBFP)对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)毒力和生物膜的抑制作用,发现FFHBFP对MRSA的抗菌作用,为临床指导用药提供理论依据与参考.方法:首先采用微量稀释法和时间-生长曲线测定FFHBFP和万古霉素(VAN)对MRSA的最低抑菌浓度(MIC)和对细菌生长的影响;而后选择亚抑菌浓度(sub-MIC)分别观察FFHBFP和VAN对MRSA毒力因子脂肪酶的抑制能力和恢复过氧化氢(H2O2)敏感性能力;采用微孔板法检测FFHBFP和VAN对MRSA生物膜形成期和成熟期的抑制能力;应用扫描电子显微镜(SEM)观察给药前后成熟生物膜在细菌形态方面的变化;结合实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测生药质量浓度50.600 g·L-1 FFHBFP对MRSA毒力基因crtM和生物膜形成基因fnbA、icaA表达的影响,最后运用分子对接技术预测FFHBFP中潜在抗菌有效成分与MRSA毒力和生物膜的作用靶点机制.结果:VAN的MIC为2 mg·L-1,在1 mg·L-1以下时不影响MRSA生长,而FFHBFP无法测定出MIC,在生药质量浓度101.200～202.400g·L-1时对生长有抑制作用;相比于空白组和VAN组,sub-MIC(生药质量浓度25.300～50.600g·L-1)具有显著抑制脂肪酶和恢复MRSA对H2O2敏感(P＜0.01);微孔板法结果显示FFHBFP(生药质量浓度25.300～202.400g·L-1)对生物膜形成期和成熟期均有明显抑制作用(P＜0.05,P＜0.01);SEM显示FFHBFP使生物膜结构疏松,菌体大小不一;生药质量浓度50.600g·L-1质量浓度FFHBFP能显著抑制相关的毒力基因和生物膜形成基因的表达(P＜0.05,P＜0.01),同时分子对接结果也显示FFHBFP主要抗菌活性成分对作用靶点有较好的结合能力.结论:FFHBFP对MRSA没有直接杀灭的能力,而是通过削弱毒力表达和生物膜形成等致病能力来发挥临床疗效.
复方黄柏液涂剂、耐甲氧西林金黄色葡萄球菌、毒力因子、生物膜
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R2-0;R22;R285.5;R289;R33
科技部中医药现代化研究重点专项;中国中医科学院科技创新工程中西医结合基础重大攻关项目;李连达院士工作站专项经费项目;中国中医科学院医学实验中心基本科研业务项目;北京自然科学基金面上项目
2022-04-20（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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