10.13422/j.cnki.syfjx.20220736
基于"肺主行水"理论探究小青龙汤调节肺水转运蛋白的作用机制
目的:观察小青龙汤及其方元对于肺水转运蛋白的调节作用,初步阐释"肺主行水"的生物学内涵,并从该角度探索其作用机制.方法:根据经方的组方规律,将小青龙汤(11.22 g·kg-1)拆分为桂枝甘草(2.70 g·kg-1)、芍药甘草(2.70 g·kg-1)、姜辛味(3.90 g·kg-1)、半夏麻黄(3.27 g·kg-1)4个方元.通过"形寒+饮冷+冷水浴"法建立寒饮蕴肺证大鼠病理模型,给予小青龙汤及其方元进行干预.肺功能分析系统测定大鼠用力肺活量(FVC)、功能残气量(FRC)、平均呼气中期流量(MMEF)、吸气时间(tI)和呼气时间(tE)等参数;苏木素-伊红(HE)染色观察大鼠肺组织病理形态学改变;免疫组化法(IHC)检测大鼠肺组织中水通道蛋白(AQP)1、AQP5、上皮细胞钠通道α亚单位(α-ENaC)和钠钾泵(Na+-K+-ATPase)表达;酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测肺组织中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测肺组织中环磷酸腺苷(cAMP)、蛋白激酶A(PKA)和cAMP反应元件结合蛋白(CREB)mRNA分子表达;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测肺组织中cAMP、PKA、CREB和磷酸化(p)-CREB蛋白表达.结果:与正常组比较,模型组大鼠FVC、FRC和MMEF功能显著下降(P＜0.01),tI与tE时间明显延长(P＜0.05,P＜0.01);肺组织中TNF-α含量显著升高(P＜0.01);肺组织中cAMP、PKA、CREB mRNA及蛋白表达显著降低(P＜0.01);肺组织中AQP5及α-ENaC表达明显减少;大鼠肺泡腔内充满水肿液,周围组织充血,炎性细胞浸润,支气管黏膜上皮黏连.与模型组比较,小青龙汤及其方元组可以明显增强模型大鼠FVC、FRC与MMEF功能(P＜0.05,P＜0.01),部分方元组可缩短tI与tE时间(P＜0.05,P＜0.01);小青龙汤组、桂枝甘草组及半夏麻黄组肺组织TNF-α的含量显著下调(P＜0.01);小青龙汤组cAMP、PKA和CREB的mRNA的表达显著上调(P＜0.01),桂枝甘草组、姜辛味组及半夏麻黄组显著上调cAMP和PKA的mRNA表达(P＜0.01);小青龙汤组、桂枝甘草组、姜辛味组及半夏麻黄组显著上调cAMP、PKA和CREB的蛋白表达(P＜0.01),芍药甘草组明显上调CREB蛋白的表达(P＜0.05);小青龙汤可以上调AQP5和α-ENaC的阳性表达,桂枝甘草组可以上调α-ENaC的阳性表达;小青龙汤及其方元各组可以减少模型大鼠肺组织水肿,炎性细胞浸润明显减少,支气管黏膜黏连程度减轻.结论:小青龙汤及其方元可以通过提高肺水转运相关蛋白AQP1、AQP5和α-ENaC的表达,减轻寒饮蕴肺证大鼠病理模型中肺水肿,抑制肺部炎症状态,改善大鼠肺功能,从而恢复肺脏的生理功能,cAMP/PKA信号通路可能参与了该过程,Na+-K+-ATPase在肺水转运调节中可能发挥了辅助作用,从肺水转运相关蛋白角度初步阐释"肺主行水"的内涵具有一定的客观依据.
小青龙汤、肺主行水、水通道蛋白、上皮钠通道、钠泵
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R2-0;R33;R289;R318.13
北京中医药大学基本科研业务费重点攻关项目;北京中医药大学校级科研纵向发展基金
2022-04-20（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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