10.13422/j.cnki.syfjx.20191024
斑蝥素诱导HCT116细胞形态改变及脱黏附机制
目的:探讨斑蝥素(cantharidin,CTD)引起人结肠癌HCT116细胞形态改变及脱黏附作用的分子机制与抑制肿瘤转移的相关性,为CTD的临床使用提供新依据.方法:将HCT116细胞接种于6孔板后,每孔加入不同浓度CTD(0,2.5,5,10,15,20μmol·L-1)培养7~10d,使用结晶紫染色液染色,对形成的克隆进行计数及统计分析,确定CTD对HCT116细胞的抑制效果;使用鬼笔环肽(phalloidin)特异性染色检测10 μmol· L-1 CTD对HCT116细胞聚合态微丝骨架(F-actin)的影响,间接免疫荧光染色法观察CTD作用后整合素蛋白含量的改变;蛋白免疫印迹法分析10 μmol· L-1 CTD作用前后Rho家族RhoA,RhoB,RhoC,Cdc42,Rac1/2/3蛋白表达量变化,根据实验结果确定RhoA为研究目标蛋白;使用质粒瞬时转染方法构建过表达RhoA的HCT116结肠癌细胞,观察10 μmol· L-1 CTD对过表达细胞骨架形态及黏附的影响.结果:CTD可引起HCT116结肠癌细胞微丝骨架重构及整合素含量减少;RhoA蛋白是CTD作用后含量变化最大的Rho酶家族成员,构建的RhoA过表达细胞中带绿色荧光的转染细胞比例约为60%,与野生型细胞相比,目标蛋白含量显著增高(P<0.01),CTD通过降低RhoA含量,逆转这一过表达效应(P<0.01),对细胞的形态及黏附均产生影响.结论:CTD可通过抑制RhoA蛋白的表达,引起HCT116结肠癌细胞形态改变及与基底的黏附减弱,游离的肿瘤细胞无法锚定于继发部位,从而抑制细胞迁移.
斑蝥素、人结肠癌HCT116细胞、细胞骨架、黏附、RhoA
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R22;R242;R2-031;R285.5(中医基础理论)
国家自然科学基金81671391
2019-05-27(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)
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