10.3969/j.issn.1006-2963.2008.04.009
NSE特异性启动IκBα突变型基因真核表达载体的构建和鉴定
目的 构建神经元特异性烯醇化酶(NSE)特异性启动的、能稳定表达IκBα突变型基因的真核表达载体.方法 采用基因工程的方法将潮霉素抗性基因和NSE特异性启动的IκBα突变型基因定向克隆入载体pBlue-script-SK中.利用酶切反应鉴定重组载体SK-hyg和SK-hyg-NSE/IkBαM.采用脂质体法分别将载体 SK-hyg和SK-hyg-NSE/IkBαM转人永生化星形胶质细胞株和PCI2细胞株中,经潮霉素(150 μg/mL)筛选出阳性克隆并扩大培养,以Western blot法检测阳性细胞株中IκBα的表达,以核因子κB(NF-κB)特异性启动表达的荧光素酶报告基因检测细胞中NF-kB的活性.结果 经限制性酶切分析证实重组载体成功,稳定转染SK-hyg和SK-hyg-NSE/IκBαM的永生化星形胶质细胞内IκBα蛋白质表达及细胞中NF-κB活性无差异.稳定转染SK-hyg-NSE/IκBαM的PC12细胞内NF-κB活性下降并有突变型IκBα的蛋白质表达,而转染SK-hyg的PC12细胞则无此现象.结论 NSE特异性启动的、能稳定表达IκBα突变型基因的真核表达载体构建成功.
启动子区、磷酸丙酮酸水合酶、基因表达、IκBα
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R741.02(神经病学与精神病学)
国家自然科学基金资助项目30300328
2008-09-01（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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255-258
