半滑舌鳎 WT1a 基因的克隆与性别分化期的表达分析
从半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)全基因组序列中获得肿瘤抑制基因 WT1a 的部分序列,然后利用RACE 技术克隆了 WT1a 基因的全长,运用组织学方法,对半滑舌鳎性腺分化早期的组织切片进行了观察,并分析了该阶段WT1a 的表达特征。克隆结果显示, WT1a 基因cDNA全长为1886 bp,开放阅读框(ORF)长为1470 bp,编码490个氨基酸,并且包含 KTS 三肽,5′-UTR 和3′-UTR 分别长为245 bp 和171 bp。在 ORF 末端发现2个微卫星(SSR)序列和2个跨膜螺旋区域,而在其他物种中未发现这些区域。氨基酸序列分析显示, WT1a 基因的保守性很高,与人的同源性高达90%。通过组织切片观察发现,该批半滑舌鳎在56 d 时性腺开始分化,并且卵巢分化早于精巢。荧光实时定量分析结果显示, WT1a 在半滑舌鳎成鱼性腺中表达量显著高于其他各组织,在肝、肾、脾、心脏等组织中有微量表达,并且在成鱼性腺中,雄鱼表达量显著高于雌鱼,雌鱼显著高于伪雄鱼。在胚胎发育各时期以及初出膜后WT1a的表达结果显示,在12 h (原肠早期)显著升高,20 h (神经胚期)达到最高。在性腺分化早期雌雄性腺中的表达结果显示, WT1a 在雌雄半滑舌鳎16~66 d 的性腺中表达量持续平稳升高,在性腺分化时期表达量并没有特殊的变化。这些研究结果说明, WT1a 基因是半滑舌鳎性别相关基因,并在半滑舌鳎的性腺分化、发育过程中持续表达,但可能对性腺的分化过程并不起决定作用。
半滑舌鳎、性别相关基因、WT1a、实时荧光定量PCR
S917(水产基础科学)
国家自然科学基金项目31072202;国家863计划项目2012AA092203;农业部公益性行业科研专项200903046;山东省泰山学者工程专项
2014-02-22（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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