对虾白斑综合征病毒囊膜蛋白VP110在中国明对虾鳃细胞中结合蛋白的鉴定与特性
为了鉴定对虾白斑病综合征病毒(WSSV)囊膜蛋白VP110在中国明对虾(Fenneropenaeus chinensis)鳃细胞中的结合蛋白,运用pET-32(a)+载体构建了1段含RGD模体的截短VP110原核重组表达质粒,转化大肠杆菌诱导表达后获得分子量为41 kD的截短重组VP110蛋白(rVP110)。以rVP110作为诱饵蛋白,运用pull-down实验结合蛋白质谱分析鉴定 rVP110结合蛋白,结果显示,中国明对虾鳃细胞中的肌动蛋白和精氨酸激酶(arginine kinase,AK)与rVP110具有结合作用。利用PCR扩增中国明对虾AK编码基因,将其与表达载体pGEX-4T-1连接后转化大肠杆菌诱导表达获得重组 AK 蛋白(rAK),通过 pull-down 实验进一步证实 rAK 可与 rVP110发生结合。克氏原螯虾(Procambarus clarkia)体内中和实验结果显示, rAK对WSSV感染克氏原螯虾具有一定的中和作用,能延缓螯虾的死亡进程。另外,中国明对虾在人工感染WSSV后,荧光定量PCR检测结果显示, AK基因表达水平显著上调,18 h时达到峰值,然后下降至正常水平；酶底物法检测结果同样显示,鳃细胞中AK酶活性在感染WSSV后发生显著上调。本研究旨在为深入了解WSSV囊膜蛋白VP110在WSSV感染宿主过程中的作用提供基础依据。
WSSV、囊膜蛋白VP110、结合蛋白、精氨酸激酶、中国明对虾、克氏原螯虾
S945(水产保护学)
国家973计划项目2012CB114405;国家科技支撑计划2012BAD17B01;国家公益性行业农业科研专项201103034
2014-02-22（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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