10.11882/j.issn.0254-5071.2017.03.028
一株芽孢表面稳定展示海藻糖合酶工程菌的构建
以枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis) 168-Tres基因组为模板,PCR扩增得到同源臂基因sleB1和cwlJ1,重叠PCR连接sleB1与卡那霉素抗性(kmr)基因,电转获得B.subtilis 168-Tres△sleB菌株;连接cwlJ1与博来霉素抗性(zeo')基因,电转获得B.subtilis 168-Tres△sleB△cwlJ菌株.结果表明,经kmr、zeor抗性筛选及PCR鉴定,成功获得sleB、cwlJ基因双缺失菌株B.subtilis 168-Tres△sleB△cwlJ;发酵结果显示,B.subtilis 168-Tres△sleB△cwlJ与出发菌株的芽孢形成率一致,约为88％;在LB固体培养基和麦芽糖转化生成海藻糖体系中B.subtilis 168-Tres的芽孢萌发数为4.8× 108 CFU/mL,B.subtilis 168-Tres△sleB△cwlJ芽孢未萌发;在麦芽糖转化生成海藻糖体系中,重组菌海藻糖合酶酶活为10.42 U,比原始菌提高了78.7％.敲除sleB、cwlJ基因后,不影响枯草芽孢杆菌生成芽孢的量,但能有效控制芽孢在上述转化体系中的萌发,使芽孢表面稳定展示海藻糖合酶,提高了芽孢的利用率.
枯草芽孢杆菌、sleB和cwlJ基因、基因敲除、芽孢萌发、海藻糖合酶
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Q784(基因工程（遗传工程）)
国家自然科学基金31501413;山东省高校创新项目J14LE02;工业发酵微生物教育部重点实验室暨天津市工业微生物重点实验室天津科技大学开放基金2016IM005
2017-04-19（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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138-143
