10.3864/j.issn.0578-1752.2009.03.040
通过耐酸性改造在昆虫细胞中组装FMDV空衣壳结构
”目的”口蹄疫病毒(FMDV)对酸很敏感,当pH值低于7时,二十面体对称的衣壳结构就会裂解成12S的五聚体.而昆虫细胞培养基的正常pH值在6.3左右,很难应用杆状病毒表达系统在昆虫细胞中组装天然的FMDV空衣壳结构.本研究旨在通过耐酸性改造,应用杆状病毒表达载体在昆虫细胞中组装产生Asia Ⅰ型FMDV空衣壳结构.”方法”应用定点突变技术改变VP3上的H140和H143为亮氨酸,以提高空衣壳对酸的耐受性.将改造和未改造的P12A基因和3C基因插入带双启动子的杆状病毒转移载体pFastBacTmDual中,通过在大肠杆菌内转座重组,获得重组杆粒,转染Sf 9细胞,获得两株表达FMDV全农壳蛋白的重组杆状病毒Bac mP12A3C和Bac P12A3C.重组杆状病毒经增殖后感染High FiveTM细胞,进行目的蛋白的表达.”结果”通过Western blotting检测表明目的基因均获得表达,且衣壳蛋白被3C蛋白酶成功地加工裂解.双抗体夹心ELISA和免疫荧光检测结果表明表达蛋白主要集中在细胞膜上,且具有很好的抗原性.通过电镜观察到P12A基因改造的重组杆状病毒在昆虫细胞内产生了直径为25～30nm的空衣壳结构,而P12A基因未改造的重组杆状病毒观察到很多直径小得多的结构.”结论”本研究首次用电子显微镜在昆虫细胞中观察到FMDV完整的空衣壳结构,为基因工程亚单位疫苗和新型诊断试剂的研发奠定了基础.
FMDV、耐酸性改造、昆虫细胞、组装、空衣壳结构
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S8(畜牧、动物医学、狩猎、蚕、蜂)
国家重点基础研究发展规划973计划2005CB523201
2009-05-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
共9页
1069-1077
