10.3969/j.issn.1000-484X.2022.23.014
抗相思子毒素抗体的嵌合改造与功能评价
目的:制备并评价针对相思子毒素(Abrin)的具有中和活性的特异性人源化嵌合抗体.方法:从鼠源单抗中钓取抗体可变区轻重链序列4条,两两配对载入人源化IgG1表达载体pFRT-KIgG1,经表达、纯化等步骤得到4株人源化嵌合抗体;间接ELISA测定嵌合抗体与Abrin的结合力;ForteBio测定嵌合抗体与Abrin的亲和力;体外细胞学实验鉴定抗体的中和功能;无细胞体系评价抗体是否阻碍Abrin抑制荧光酶合成;选择6～8周雌性BALB/c小鼠,腹腔注射Abrin和不同浓度抗体,观察抗体的体内保护效应;流式细胞术分析抗体是否阻断Abrin与细胞的结合.结果:ELISA和ForteBio结果显示,4株嵌合抗体中仅H1L1嵌合抗体与Abrin的结合[EC50=(0.1212±0.0040)μg/ml和亲和力(亲和常数3.97×10?10 M)]与母本抗体[EC50=(0.15825±0.00235)μg/ml,亲和常数5.59×10?10 M]相似;体外细胞保护试验显示,H1L1[EC50=(3.7455±0.0575)ng/ml]约为母本抗体[EC50=(1.5825±0.5335)ng/ml]中和作用的42％;无细胞体系荧光素酶合成试验显示,H1L1[EC50=(0.6729±0.0755)μg/ml]与母本抗体[EC50=(1.0365±0.0045)μg/ml]接近,均能逆转Abrin抑制蛋白合成的作用;BALB/c小鼠体内中和保护实验结果显示,H1L1与10D8均能提供良好的体内保护作用;流式细胞术分析发现,H1L1并不能通过抑制Abrin黏附或进入细胞抑制其毒性.结论:4株嵌合抗体中,仅H1L1是轻、重链正确配对且拥有良好中和活性的候选抗体,有潜在的用于Abrin中毒救治的开发价值,应用前景良好.
相思子毒素、中和性抗体、人源化嵌合改造、基因钓取
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R392.33
2023-02-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
共6页
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