10.3969/j.issn.1000-484X.2019.23.003
抗钠-钙交换体α-2(840-877)单克隆抗体3F10的制备及其预处理对大鼠缺血性心律失常的抑制作用
目的:制备和纯化抗钠-钙交换体(Na+-Ca2+exchanger,NCX)α-2(840-877)单克隆抗体,并观察该抗体对大鼠缺血性心律失常的影响.方法:利用化学合成的NCXα-2(840-877)肽段为免疫原免疫BALB/c小鼠,利用杂交瘤技术和间接ELISA法筛选,获得可稳定分泌NCXα-2(840-877)单克隆抗体的杂交瘤细胞株.通过ELISA和SDS-PAGE等方法检测其效价和纯度.结扎冠脉左前降支建立大鼠缺血性心律失常模型.缺血前5 min用3F10(10μg/m1)抗体灌注离体心脏,在体实验经大鼠尾静脉注射3F10(50μg/kg)抗体,观察抗体大鼠室早数目、室速和室颤发生率和持续时间的影响.应用全细胞膜片钳技术观察3F10(10μg/m1)抗体对正常大鼠心肌细胞INa/Ca的影响.结果:①成功制备并获得抗NCXα-2(840-877)单克隆抗体3F10,其效价和浓度分别为1:40960、1.62 mg/m1.②3F10抗体预处理可明显抑制大鼠离体和在体缺血性心律失常的发生.缺血前5 min给予3F10(10μg/m1)抗体预处理后,离体心脏的室速、室颤的发生率分别由100％和77.78％降至25％和25％,其持续时间和室早的个数也明显减少(P<0.05).在麻醉大鼠,当给予3F10(50μg/kg)抗体预处理后,与模型组相比,大鼠室速和室颤的发生率分别由100％和83.33％降至33.33％和33.33％,其持续时间及室早的数目均明显减少(P<0.05).③膜片钳实验发现3F10抗体(10μg/m1)对INa/Ca具有显著抑制作用.在钳制电位为+50 mV和-100 mV时,外向和内向INa/Ca分别由(3.23±0.05)和(-50.57±0.13)pA/pF降至(2.14±0.03)和(-3.14±0.06)pA/pF(P<0.05).结论:成功获得一株可稳定分泌抗NCXα-2(840-877)单克隆抗体的杂交瘤细胞株(3F10),该抗体预处理对大鼠缺血性心律失常具有显著抑制作用,推测其作用机制与抑制心肌INa/Ca有关.
缺血性心律失常、钠-钙交换体、单克隆抗体、全细胞膜片钳
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R392.1;R331.3
山西省归国留学人员基金资助项目2017-055;山西省重点实验室建设项目2015012003-08
2020-04-10（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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