10.3969/j.issn.1000-484X.2018.02.015
抗铜绿假单胞菌PcrV蛋白单克隆抗体的筛选和功能验证
目的:获得能应用于治疗铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)感染的抗PcrV蛋白全人源单克隆抗体.方法:以铜绿假单胞菌PAO1基因组为模板,PCR 扩增 PcrV 基因并构建重组表达载体 pET-28a-PcrV,转化至大肠杆菌 BL21 (DE3),利用IPTG诱导表达,并通过镍离子螯合树脂亲和纯化PcrV蛋白.利用噬菌体抗体库筛选PcrV结合的噬菌体克隆并进行序列测定,以测序正确的阳性克隆质粒为模板,PCR扩增该抗体的重链可变区基因和轻链可变区基因并构建重组表达载体转染至293E细胞,收取培养细胞上清,并利用Protein A树脂亲和纯化抗体.利用ELISA实验检测抗体亲和力,并通过小鼠铜绿假单胞菌感染肺炎模型验证抗体活性.结果:获得重组蛋白PcrV,通过噬菌体展示技术筛选并制备了一株全人源抗PcrV单克隆抗体YG5.ELISA实验结果表明YG5抗体具有较高的亲和力(EC50=61 ng/ml),进一步的实验结果表明,YG5能有效抵抗铜绿假单胞菌感染,降低小鼠的死亡率.结论:靶向铜绿假单胞菌PcrV蛋白的全人源单克隆抗体YG5能够有效地抑制铜绿假单胞菌致病性,降低其对机体感染,有可能成为抗铜绿假单胞菌感染的治疗性抗体.
铜绿假单胞菌、PcrV蛋白、单克隆抗体、急性肺炎模型
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R392.1
国家自然科学基金资助31170074
2018-03-26（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
共6页
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