10.3969/j.issn.1000-484X.2015.01.016
人颗粒酶A活性段的表达、纯化及其活性鉴定
目的：克隆和表达人颗粒酶A（ Granzyme A，GzmA）基因的活性片段（ active Granzyme A，aGzmA）并进行活性鉴定。方法：以全长人GzmA基因为模板，PCR扩增aGzmA基因片段，限制性内切酶NdeⅠ和XhoⅠ双酶切后插入原核表达载体pET24a（＋），将重组质粒转化大肠杆菌BL21（DE3），IPTG诱导表达，表达产物经SDS－PAGE和Western blot进行分析。重组蛋白用镍层析柱亲和层析进行纯化后，利用BLT底物溶液进行活性鉴定。结果：PCR扩增得到长约700 bp的基因片段。重组质粒pET24a－aGzmA经酶切和测序证实aGzmA基因序列正确插入载体质粒中。 SDS－PAGE显示在26 kD处有一特异性蛋白条带。 Western blot证实该蛋白可与小鼠抗His 单克隆抗体发生特异性结合。利用镍柱亲和层析法可从包涵体中纯化得到纯度较高的重组蛋白，且具有较好的酶活性。结论：成功制备了具有生物学活性的人颗粒酶A重组蛋白。
颗粒酶A、克隆、大肠杆菌、表达、活性测定
R392.11
国家自然科学基金81072459;教育部新世纪优秀人才支持计划NCET－12－0179;上海大学生创新活动计划项目KY2012－56S;国家大学生创新训练计划项目 No．1310269032资助项目。
2015-01-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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