10.3969/j.issn.1000-484X.2014.02.019
全人源scFv-Fc真核表达载体的构建与鉴定
目的:构建全人源抗IL-33 scFv-Fc重组载体,转染中国仓鼠卵巢细胞(Chinese hamster ovary cells,CHO),表达并鉴定融合抗体蛋白.方法:RT-PCR扩增人IgG1 Fc段并捅入真核表达载体pcDNA3.1中,构建pcDNA3.1/Fc重组载体;将合成的信号肽(SP)序列插入重组质粒pcDNA3.1/Fc,构建重组pcDNA3.1/SP-Fc通用载体;最后将本实验室前期筛选的抗IL-33 scFv插入重组质粒pcDNA3.1/SP-Fc中,构建重组pcDNA3.1/SP-scFv-Fc载体,测序正确后转染CHO细胞.RT-PCR 、Westem blot检测目的基因的转录及表达.结果:重组质粒测序结果表明成功地构建了pcDNA3.1/SP-scFv-Fc重组真核表达载体,插入的SP-scFv-Fc目的基因大小为1 560 bp左右.转染CHO细胞后,RT-PCR结果显示目的基因在CHO细胞中成功转录,Western blot显示表达的蛋白可以和羊抗人IgG1 Fc抗血清发生特异性免疫反应.结论:成功构建了pcDNA3.1/SP-scFv-Fc重组真核表达载体,以便于后续在CHO细胞中表达.
scFv-Fc、CHO细胞、真核表达、IL-33
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R392.11
国家自然科学基金31000415;四川省青年基金2012JQ0018;泸州市科技局项目13ZB0262
2014-04-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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