10.3969/j.issn.1000-484X.2012.02.005
EGFL7的重组表达及其抗体制备和初步应用
目的:新近研究发现EGFL7蛋白与肝癌密切相关.本研究对基因egfl7进行克隆、表达并制备多克隆抗体,为进一步研究其功能奠定基础.方法:通过RT-PCR方法,从人肝癌细胞系HepG2细胞中扩增egfl7目的片段,利用基因重组技术构建pET21a(+)-TRX-EGFL7原核表达载体,用IPTG诱导其在大肠杆菌BL21(DE3)中表达.His-tag磁珠纯化试剂盒纯化重组蛋白EGFL7,SDS-PAGE鉴定.将纯化的重组蛋白免疫BALB/c小鼠制备多克隆抗体,采用ELISA、Western blot方法检测抗体的灵敏度和特异性,并测定临床血清标本中EGFL7蛋白水平.结果:成功地构建了原核表达质粒pET21a(+)-TRX-EGFL7.并在大肠杆菌BL21(DE3)内得以高效表达,且以包涵体的形式存在.SDS-PAGE和Western blot证实,重组EGFL7蛋白质与预期结果一致,抗血清能够特异地识别重组蛋白和血清蛋白质.结论:成功制备了EGFL7蛋白质和多克隆抗体,能用于后续研究.
肝细胞癌、蛋白质表达、EGFL7、多克隆抗体
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R735.7(肿瘤学)
国家重点基础研究发展计划973计划资助2010CB833605
2012-04-19（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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117-121
