氯通道ClC-2融合蛋白的原核表达及体外磷酸化
目的:检测ClC-2是否能被促分裂原活化蛋白激酶(MAPK)磷酸化,为进一步研究其在细胞增殖、分化过程中的调控机制提供基础.方法:从含有家兔ClC-2 cDNA的质粒pSPORT1中PCR扩增ClC-2胞浆内的羧基端DNA编码序列,构建重组载体pGEX-4T-1/ClC-2CT;重组质粒经酶切、测序鉴定正确后转化大肠杆菌BL21菌株;经异丙基β-D-硫代半乳糖(IPTG)诱导后,通过Gluthathion Sepharose 4B亲和层析柱纯化融合蛋白;并行融合蛋白的体外磷酸化实验.结果:酶切、测序鉴定重组载体pGEX-4T-1/ClC-2CT构建正确,并纯化得到GST/ClC-2CT融合蛋白.而且该融合蛋白能被MAPK磷酸化,而GST不能被MAPK磷酸化.结论:氯通道ClC-2能被MAPK磷酸化.
氯通道ClC-2、融合蛋白质类、促分裂原活化蛋白激酶(MAPK)、蛋白质体外磷酸化
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R35(人体生物物理学)
国家自然科学基金30571993
2006-12-18(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)
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